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目的:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是原发性肝癌最常见的一种组织学类型。作为一种常见的恶性肿瘤,HCC对全球疾病和死亡率的负担有着显著的贡献,是全球癌症死亡的第二大原因。尿激酶纤溶酶原受体激活物(Urokinase plasminogen activator receptor,uPAR)是淋巴细胞抗原6(Lymphocyte antigen 6,Ly-6)超家族的成员之一,在肝细胞癌中高表达,并与肝癌的发生发展进程密切相关。本研究观察了uPAR对肝癌进展的影响,探讨潜在的分子机制,并进一步分析了uPAR与整合素之间的关系。方法:为了探索uPAR在肝癌细胞SMMC-7721中的功能,我们使用uPAR-siRNA慢病毒对肝癌细胞进行转染,下调肝癌细胞SMMC-7721中的uPAR的表达。通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot,WB)验证uPAR在mRNA和蛋白水平的沉默效果,并筛选稳定沉默uPAR基因的转染细胞株进行扩增培养,将其作为uPAR-siRNA沉默组。与此同时,采用阴性对照病毒转染的细胞作为阴性对照组(NC组),未经任何处理的细胞作为空白对照组(BC组)。转染后采用CCK-8实验验证沉默后SMMC-7721细胞的增殖能力,采用划痕实验,transwell迁移和侵袭实验分别验证细胞的迁移和侵袭功能,克隆形成实验则用于检测细胞的克隆形成能力。此外,为探究uPAR与整合素之间的相互作用,我们采用RT-PCR和WB实验检测了下调uPAR对整合素α5的影响。SPSS 22.0软件用于对测量数据的分析,组间比较采用单因素方差分析进行统计。结果:下调uPAR基因的稳定肝癌细胞株SMMC-7721构建成功。RT-PCR和Western blot结果显示,uPAR-siRNA慢病毒转染组uPAR mRAN和蛋白表达量均显著少于阴性慢病毒转染组和空白对照组,沉默效率达94.2%,差异具有统计学意义(P<0.05)。CCK-8检测细胞增殖实验发现,与其他两组对比,uPAR-siRNA沉默组在48h至120h内增殖能力降低(P<0.05),细胞增殖能力受到抑制;划痕实验结果显示,沉默组24h时划痕空白区域面积大于对应时间点的其他两组细胞面积,差异具有统计学意义(P<0.05);同样,Transwell迁移实验也得到了类似的结果,uPAR-siRNA沉默组迁移细胞数为63.40±8.11个,明显少于BC组(162.40±11.13)和NC组(155.47±11.75)的迁移细胞数,差异具有统计学意义(P<0.05),说明uPAR基因的敲低可显著抑制SMMC-7721的迁移功能;Transwell侵袭结果表明,uPAR-siRNA慢病毒转染后,通过Matrigel基质胶的侵袭细胞数减少,细胞侵袭能力明显降低(P<0.05);克隆形成实验中,BC组、NC组、沉默组细胞形成的克隆个数分别为387.67±12.90、365.67±15.04和121.67±7.64,沉默组克隆形成能力受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot结果显示,uPAR的敲低可导致肝癌细胞SMMC-7721中整合素α5 mRNA和蛋白表达水平的下调,抑制率达76.2%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:通过慢病毒转染可成功构建沉默uPAR的SMMC-7721细胞株。uPAR水平的下调可以抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力并且导致整合素α5水平的降低。我们的研究验证了uPAR在SMMC-7721细胞中的作用,提示其可能作为肝癌治疗中的潜在靶点。