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前言:
蛋氨酸脑啡肽(Methionine Enkephalin,MENK)是由体内肾上腺产生的前激素和前脑腓肽衍生而来,是由酪-甘-甘-苯丙-蛋氨酸残基构成的五肽。蛋氨酸脑啡肽受体:又称阿片生长因子受体(Opioidgrowthfactorreceptor,OGFr),经典阿片受体可分为μ(mu)、δ(delta)、κ(kappa)等几种亚型。作用于免疫系统的主要是δ、μ受体,主要表达在淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞和粒细胞上。MENK与上述受体结合参与免疫功能的调节,其主要以自分泌或旁分泌途径与表达上述受体的免疫细胞结合,可双向调控胞内cAMP、钙离子以及蛋白激酶A的水平,通过影响第二信号通路而发挥免疫调节效应。在过去的研究中,证明了MENK单独或与其他细胞因子(IL-2或IFN-γ)联合应用能够增强机体免疫细胞的功能,但具体作用机制尚不清楚,特别是对淋巴细胞各亚群的作用,经MENK刺激后淋巴细胞各亚群数量和活性的变化,至今未见报道。
本实验应用现代免疫学和分子生物学技术研究MENK对人外周血淋巴细胞亚群的影响,同时与IL-2和IFN-γ做出比较分析,特别是DC、NK、NKT、毒性T、γδT及Treg,为应用MENK治疗恶性肿瘤进一步提供理论依据,同时为肿瘤生物疗法提供一种新的途径。
实验材料和方法:
一、实验对象
15名健康志愿者参加此项研究,其中男4人,女11人,平均年龄26.8岁
二、实验方法
1、密度梯度离心法分离健康志愿者外周血淋巴细胞;
2、流式细胞术检测不同处理组淋巴细胞各亚群的变化情况;
3、半定量RT-PCR检测比较各亚群相关分子的mRNA表达水平。
实验结果:
1、流式细胞术和RT-PCR检测CD8+CD28+T细胞结果
各实验组CD8+CD28+T数量与对照组相比均有不同程度增加(p＜0.05,其中MENK组增加最为显著,与IL-2组和IFN-γ组相比有差异(p＜0.05)。
RT-PCR检测了CD8,CD28分子mRNA的表达水平,结果显示MENK组mRNA表达量明显增加(p＜0.05)。
2、流式细胞术和RT-PCR检测γδT细胞结果
MENK组和IL-2组γδT数量与对照组相比均有不同程度增加(p＜0.05),而IFN-γ组则无明显差异,其中MENK组增加最为显著,与IL-2组和IFN-γ组相比有差异(p＜0.05)。
RT-PCR检测了γδTCR分子mRNA的表达水平,结果显示MENK组mRNA表达量明显增加(p＜0.05)。
3、流式细胞术和RT-PCR检测NK和NKT细胞结果
MENK组NK细胞和NKT细胞数量与对照组相比,均有明显增加(p＜0.05),与IL-2组和IFN-γ组相比无明显差异。
RT-PCR检测了CD3,CD16和CD56分子mRNA的表达水平,结果显示MENK组mRNA表达量均明显增加(p＜0.05)。
4、流式细胞术和RT-PCR检测Treg细胞结果
MENK组与对照组相比,Treg细胞数量显著减少(p＜0.05),与IL-2组和IFN-γ组相比有统计学意义(p＜0.05)。
RT-PCR检测了CD4,CD25和Foxp3分子mRNA的表达水平,结果显示MENK组Foxp3mRNA表达量明显降低(p＜0.05)。
5、流式细胞术和RT-PCR检测DC细胞结果
MENK组DC细胞数量与对照组相比有明显增加(p＜0.05)。
RT-PCR检测了CD1α分子mRNA的表达水平,结果显示MENK组mRNA表达量明显增加(p＜0.05)。
结论:
1、适宜浓度的MENK能够促进DC、NK、NKT、毒性T、γδT细胞的增殖
2、适宜浓度的MENK能够抑制Treg的增殖;
3、在促进淋巴细胞亚群增殖方面,MENK比IL-2和IFN-γ显示了更强大的作用。