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目的:卵巢上皮性癌(EOC,epithelial ovarian cancer,以下简称卵巢癌)是妇科恶性肿瘤领域内死亡率最高的疾病,5年生存率长期徘徊在30%左右。卵巢癌起病隐匿,早期诊断困难,75%的患者就诊时已到临床晚期,晚期患者的5年生存率仅20%左右,而早期则高达85%-90%。目前临床常用卵巢癌诊断和监测指标是血清CA125,但由于CA125人有一定的局限性且特异性不高,很多生理状态和良性疾病也有所升高,所以长期以来临床上亟需一个更灵敏的卵巢癌诊断和病情监测血清学指标。近年来很多学者致力于卵巢癌早期诊断的研究,但至今没有找到血清CA-125之外可应用于临床的更有效血清学指标。目前循环无细胞DNA(cfDNA,circulating cell-free DNA)的研究报道越来越多,cfDNA是存在于血清或血浆中的碎裂的核酸片段,可能来源于程序性死亡细胞和肿瘤细胞坏死所释放的核酸片段,关于其在临床各种癌症的研究在八十年代后期重新受到人们的关注。近来几项研究也表明在头颈癌、肺癌和结肠癌患者的血清中检测肿瘤特异性遗传基因改变是有可能的[1-3]。重要的是,肿瘤细胞特异性DNA改变不仅存在于癌症转移患者的血清中而且也存在于原发的癌症早期患者的血清中[1-3]。有报道使用ALU247/ALU115的比值来代表乳腺癌患者血清中的肿瘤相关cfDNA,并证明其与乳腺癌的疾病进展和瘤负荷呈正相关,ALU115代表患者血清中cfDNA的总量,ALU247代表患者血清中肿瘤相关cfDNA的总量[7]。本试验采用半定量PCR的方法测量卵巢癌患者血清中无细胞DNA中的肿瘤相关DNA(ALU247/ALU115)及CA-125基因片段的水平,探讨其与卵巢癌临床分期,病理学类型和疾病进展的关系。另外还讨论卵巢癌患者血清无细胞CA125 DNA(CA125-cfDNA,CA125的基因)与CA125在卵巢癌病情监测中的相关性,为卵巢癌临床诊断及病情监测提供了一个新的标记物。方法:卵巢癌及卵巢良性肿瘤的标本来源于2005年12月～2006年12月河北医科大学第四医院妇科住院患者,共计卵巢癌病例48例,良性卵巢上皮性肿瘤16例,正常健康对照12例。病例均经组织病理和临床手术确定,病例分期标准采用FIGO2000年修订的手术病理分期。其中宫内膜样癌16例,浆液性囊腺癌26例,粘液性囊腺癌6例,平均年龄50.17岁。良性上皮性肿瘤组16例来自河北医科大学第四医院妇科同期住院的卵巢良性肿瘤患者,其中浆液性囊性腺瘤11例,粘液性囊腺瘤5例,平均年龄为48岁。健康对照组12例其中6例来自河北医科大学第四医院妇科同期住院的子宫脱垂患者,6例来自同一所医院的妇科大夫,健康对照组平均年龄为45岁。血清标本采集:卵巢癌患者的血清标本包括术前、术后三天和23例术后化疗二疗程后卵巢癌患者的血清,血清标本均是晨起空腹,抽取5ml静脉血,置入含促凝剂试管中,放置4℃冰箱在六小时内处理。腹水标本的采集:收集了上述卵巢癌患者中26例术前未化疗的腹水标本,取自开腹后打开腹膜一小口腹腔探查前用20ml无菌注射器抽吸腹水20ml,取后立即处理。用QIAGEN的微量提取试剂盒提取血清中游离的DNA片段后用半定量PCR扩增ALU重复片段、β-actin, CA125 DNA片段,血清肿瘤相关cfDNA的量用ALU247/ALU115来表示,CA125-cfDNA的相对水平用CA-125 DNA/β-actin来表示。试验结果采用SPSS10.0统计软件进行组组间和单因素多样本均数比较的方差分析t检验和spearman相关分析进行统计学处理。结果:1肿瘤相关cfDNA在卵巢癌患者血清中的表达卵巢癌术前肿瘤相关cfDNA的量为(0.597±0.280),良性肿瘤为(0.283±0.062),健康对照为(0.158±0.021),卵巢癌术前肿瘤相关cfDNA的水平明显高于正常对照组及卵巢良性肿瘤,差异有显著性(P<0.05),正常对照组及卵巢良性肿瘤的组间比较无统计学差义。见Table 3。卵巢癌术后肿瘤相关cfDNA的量为(0.617±0.158),术后化疗二程后为(0.384±0.196),卵巢癌术前及术后肿瘤相关cfDNA水平明显高于正常对照组及术后化疗二程租,差异有显著性(P<0.05),化疗二程后明显高于健康对照组,有显著性差异(P<0.05),术前、术后组间比较结果显示无显著性差异(P>0.05)。见Table 5、6、7。III-IV期卵巢癌患者的肿瘤相关cfDNA水平为(0.766±0.167)明显高于I-II期(0.490±0.142),有统计学差异,说明肿瘤相关cfDNA水平与临床分期相关,(P<0.05),病理学类型及病理分级间无统计学差异(P>0.05)。见Table 2、4、9。2 CA125-cfDNA在卵巢癌患者血清中的表达卵巢癌CA125-cfDNA的相对水平用CA125-cfDNA/β-actin的比值作为表达参数,起到校正作用以减少加样不均所造成的误差。卵巢癌CA125-cfDNA的相对水平术前为(1.249±0.780),卵巢良性上皮性肿瘤为(0.751±0.203),正常健康对照为(0.192±0.060),卵巢癌术前CA125-cfDNA的相对值明显高于正常对照及卵巢良性肿瘤,差异有显著性(P<0.05);良性肿瘤与正常健康对照组无显著性差异(P>0.05)。见Table 3。卵巢癌CA125-cfDNA的相对水平术后为(1.229±0.555),化疗二程后为(0.770±0.225),术前及术后血清无细胞DNA的相对值明显高于正常对照及术后化疗二程组,差异有显著性(P<0.05),化疗二程后明显高于健康对照组,有显著性差异(P<0.05),术前术后组间比较结果显示无显著性差异(P>0.05)。见Table 5、6、7。卵巢癌CA125-cfDNA的相对水平III-IV期的值明显高于I-II期有显著的统计学差异,(P<0.05);卵巢浆液性癌,粘液性癌与宫内膜样癌不同的病理类型间比较无明显差异(P>0.05),说明肿瘤相关CA125-cfDNA水平与临床分期相关,(P<0.05),病理学类型及病理分级间无统计学差异(P>0.05)。见Table 2、4、9。3卵巢癌患者血清中CA125-cfDNA与血清CA125的相关性分析:卵巢癌的CA125-cfDNA相对水平与血清CA125的水平用spearman相关性分析显示r为0.878并有有显著的统计学差异(P<0.05)存在正相关关系,而两者在二程化疗后的r为0.6并且P=0.4>0.05无统计学差异没有相关性。4卵巢癌腹水中的CA125-cfDNA的表达:腹水的无细胞CA-125 DNA的相对水平为(2.84515±0.318),是血清值的近2.5倍。见Table 8。结论:根据实验结果得出以下结论1卵巢癌患者肿瘤相关长片段cfDNA术前的值明显高于卵巢良性肿瘤患者和健康对照,而健康对照和良性肿瘤的组间比较没有明显的统计学差异,提示这肿瘤相关长片段cfDNA可以用于卵巢上皮性肿瘤良恶性鉴别诊断。2卵巢癌患者肿瘤相关长片段cfDNA术前或术后的值均高于化疗二程后和健康对照的值有显著差异,组间两两比较均有明显的统计学差异,提示肿瘤相关长片段cfDNA与瘤负荷呈正相关,可以作为卵巢癌的病情监测的指标。3卵巢癌患者肿瘤相关长片段cfDN III-IV期的值明显高于I-II期,统计学显示有显著性差异,而不同病理类型间的组间两两比较无统计学差异,提示肿瘤相关长片段cfDNA可以用于卵巢癌的早期诊断和病情监测。4 CA125-cfDNA与CA125的术前及二程化疗后的值做相关性比较结果显示两个指标之间呈正相关关系,但CA-125在粘液性卵巢癌中的表达往往趋于正常值,然而CA125-cfDNA在不同的病理学类型之间的组间两两比较没有明显的统计学差异,在二程化疗后明显高于健康对照的值,有显著的统计学差异,所以CA125-cfDNA可以作为卵巢癌尤其卵巢粘液性囊癌诊断和监测中作为血清CA125的一个有效的补充。