柿子是我国的大众水果，占世界总产量70％以上，其营养丰富，风味独特，具有很高的食用价值及医疗保健价值，但不耐贮藏。本论文利用转基因技术，将1-氨基-1-羧基环丙烷（ACC）合成酶的RNAi基因导入了次郎柿中，有望在今后几年获得抗软化的柿果。1、次郎柿转基因体系的建立以次郎柿组培苗叶片为外植体，较系统地研究了次郎柿转基因的工艺条件。研究结果：1．1确定了适宜的抗生素浓度。比较了不同（具体浓度）头孢霉素浓度抑菌效果，其中200mg／L头孢霉素可以抑制农杆菌的繁殖。比较20、30、40、50、60mg／L壮观霉素对不定芽生长的情况，选择出了适宜的壮观霉素为30 mg／L。1．2次郎柿转基因工艺路线采用继代三年半的组培苗，取其顶端2～3片刚展开的嫩叶，从叶基部剪取0.5mm²大小的叶片，叶背朝上，接种在DKW（1／2N）+ZT 1.0mg／L+TDZ 0.5mg／L的培养基上；暗预培养4d后，用OD₆₀₀0.5的菌液浓度侵染叶片10min，侵染时加入50mg／L的乙酰丁香酮。将侵染后的叶片外植体，再转到DKW（1／2N）+ZT 1.0mg／L+TDZ 0.5mg／L的培养基上共培养3d，之后移入DKW（1／2N）+ZT 1.0mg／L+TDZ 0.5 mg／L+Cef 200 mg／L的培养基上黑暗脱菌培养3 d；最后转入DKW（1／2N）+ZT 1.0mg／L+TDZ 0.5mg／L+Cef 200mg／L+Sp 30mg／L的培养基上光照选择培养，每20d继代一次。继代3次后转入DKW+ZT 1.0 mg／L+Sp 30 mg／L+Cef 200 mg／L的培养基中。叶片分化率最高可达27％。获得了次郎柿ACC合成酶的RNAi基因转基因苗。经PCR检测得到8株转基因植株，占再生芽的1.6。2、次郎柿组培苗生根移栽体系的确定2．1选取在DKW+ZT 1.0mg／L培养基中，高15～25 mm的、生长健壮的组培苗为外植体，留顶端2～3片展开的嫩叶，接种在1／2 MS+IBA 1.0 mg／L的培养基（蔗糖浓度20g／L）中，暗培养7d后，光照36μmol／m²s培养30d。在此条件下，次郎柿组培苗的生根率达到95％以上，不定根条数为4.8。2．2生根苗在180μmol／m²s的光照条件下，炼苗7d；将苗小心取出，洗净、消毒，栽入高温灭菌过的蛭石中。移栽时空气相对湿度控制在90％以上，温度为25℃，光照强度为180μmol／m²s。一星期后逐渐降低湿度（80％以上）；逐渐加强光照，至180～540μmol／m²s，在介质中存活40d。