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乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一,严重危害女性健康。近几十年来,尽管治疗效果取得了长足的进步,但发展中国家乳腺癌的发病率仍在大幅上升。因此,开发新的药物治疗乳腺癌显得十分重要。柯里拉京(Corilagin)是一种天然多酚类物质。研究表明,柯里拉京具有抗肿瘤、抗痛觉过敏、抗病毒、治疗心血管疾病等多种生物活性,且不良反应低,近年来受到研究者的广泛关注,但其在乳腺癌中的生物学作用和潜在机制却鲜有报道。程序性细胞死亡主要包括凋亡、自噬和程序性坏死。凋亡是程序性死亡的普遍途径;自噬是调控细胞存活的方式,然而一旦超过基本水平,自噬就成为诱导细胞死亡的方式;程序性坏死是可被调控的坏死。本论文以此为研究背景,主要阐明柯里拉京诱导人乳腺癌MCF-7细胞和SK-BR3细胞死亡方式及其潜在的作用机制。首先,通过MTT和EdU实验检测细胞增殖,结果显示柯里拉京在体外可抑制乳腺癌MCF-7和SK-BR3细胞的增殖,但其对人乳腺上皮MCF-10A细胞、人胃黏膜GES-1细胞,人正常肝L02细胞抑制增殖作用较小;通过Western blotting和酶活力实验检测细胞凋亡,结果显示柯里拉京诱导乳腺癌MCF-7细胞发生caspase依赖和caspase非依赖两种方式的凋亡;通过Western blotting检测自噬相关蛋白的表达水平,同时,通过免疫荧光观察斑点样LC3的表达量、透射电子显微镜观察自噬体,结果显示柯里拉京可诱导乳腺癌MCF-7细胞发生Akt/mTOR通路调控的自噬;此外,通过MTT和Western blotting实验检测自噬晚期抑制剂CQ对细胞死亡的影响,结果显示抑制乳腺癌MCF-7细胞的自噬可促进细胞凋亡,提示自噬可能作为一种保护途径存在;最后,通过DCFH-DA探针标记细胞检测ROS水平,同时通过Western blotting检测ROS对细胞死亡的影响,结果显示柯里拉京可诱导乳腺癌MCF-7细胞产生ROS,并且使用ROS阻断剂NAC可显著降低乳腺癌MCF-7细胞的凋亡和自噬,说明柯里拉京诱导ROS依赖的凋亡和自噬。通过MTT实验检测程序性坏死抑制剂Nec-1对乳腺癌SK-BR3细胞死亡的影响,结果显示SK-BR3细胞的死亡不能被Nec-1抑制,而HT-29细胞(阳性对照)的死亡却能被Nec-1抑制;同时,通过Western blotting检测RIP1、RIP3的表达水平,结果显示,柯里拉京不能增加乳腺癌SK-BR3细胞RIP1、RIP3的表达水平,却能增加HT-29细胞RIP1、RIP3的表达水平。以上结果表明:柯里拉京不能诱导高表达RIP3的乳腺癌SK-BR3细胞发生程序性坏死。最后,在裸鼠皮下接种乳腺癌MCF-7细胞成瘤后,腹腔注射不同剂量的柯里拉京检测柯里拉京在体内抗瘤作用。通过统计肿瘤体积,观察到柯里拉京可抑制肿瘤的生长;通过Western blotting和免疫组化分别检测肿瘤组织内凋亡蛋白caspase-3,PARP和增殖细胞核蛋白PCNA的表达水平,结果显示柯里拉京能诱导肿瘤细胞发生凋亡且降低PCNA的表达水平。以上结果表明:柯里拉京在体内具有抗肿瘤效果。综上所述,本论文研究结果证实:一方面,柯里拉京能够诱导乳腺癌MCF-7细胞发生ROS依赖性的凋亡和自噬,但柯里拉京不能诱导高表达RIP3的乳腺癌SK-BR3细胞发生程序性坏死;另一方面,柯里拉京在体内能抑制肿瘤的发生发展。以上研究数据可为柯里拉京应用于乳腺癌的治疗提供理论依据。