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目的:研究雷帕霉素、PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235及两者联合对鼻咽癌细胞株CNE-2的生长、增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路中主要靶点的影响,探讨NVP-BEZ235联合雷帕霉素对体外鼻咽癌细胞株CNE-2的作用及可能机制。方法:将鼻咽癌细胞株CNE-2进行体外培养,分为四组:1.NVP-BEZ235单药组;2.雷帕霉素单药组;3.NVP-BEZ235+雷帕霉素联合组;4.对照组。NVP-BEZ235单药组设置为含浓度100nmol/L的NVP-BEZ235。雷帕霉素单药组设置为含浓度100nmol/L的雷帕霉素。而NVP-BEZ235+雷帕霉素联合组设置为混合终浓度100nmol/L的NVP-BEZ235和雷帕霉素。对照组设置为含浓度100nmol/L的药物溶剂(不含受试药物)。具体研究方法包括:1.光学显微摄影下观察上述作用后4组CNE-2细胞的形态学变化,拍照并记录;2.MTT法检测单药及联合应用对CNE-2细胞增殖能力的影响;3.RT-PCR及Western Blot检测单药及联合应用对CNE-2细胞PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达水平的影响;4.流式细胞术检测单药及联合应用对CNE-2细胞凋亡的影响。结果:1.经雷帕霉素或NVP-BEZ235单药组处理48h后的CNE-2细胞出现凋亡形态学改变。且NVP-BEZ235+雷帕霉素组与单药组相比,CNE-2细胞表现出更明显的细胞凋亡形态学改变。2.药物作用后3个处理组与对照组的CNE-2细胞增殖抑制率之间的差异有统计学意义(P<0.01),但联合组与单药组的增殖抑制率之间的差异无统计学意义(P>0.05)。证明NVP-BEZ235、雷帕霉素单药组及两药联合组均能明显抑制CNE-2细胞的增殖,但联合用药组较单独用药组CNE-2细胞增殖抑制效应无明显提高。3.(1)NVP-BEZ235单药组降低CNE-2细胞PI3K和Akt mRNA及蛋白的表达水平;雷帕霉素单药组对CNE-2细胞PI3K和Akt mRNA及蛋白的表达水平无明显影响;联合应用时,明显降低CNE-2细胞PI3K和Akt mRNA及蛋白的表达水平,较NVP-BEZ23或雷帕霉素单药组更为显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)雷帕霉素和NVP-BEZ235单药组均显著降低CNE-2细胞m TOR mRNA及蛋白的表达水平;而且两药联合相比于单药组,明显降低CNE-2细胞mTOR mRNA及蛋白的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.两单药组分别与对照组相比,细胞凋亡率有所增加,差异有统计学意义(P<0.05);联合组与对照组相比,细胞凋亡率明显增加,且差异有显著统计学意义(P<0.01);联合组与两单药组相比,细胞凋亡率增加,且差异具有统计学意义(P<0.05)。证明联合组对CNE-2细胞的诱导凋亡作用强于NVP-BEZ235单药组或雷帕霉素单药组。结论:1.雷帕霉素和NVP-BEZ235阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路,且在体外水平抑制鼻咽癌CNE-2细胞生长及增殖,诱导细胞凋亡;2.雷帕霉素和NVP-BEZ235的联合应用在体外水平可提高对鼻咽癌CNE-2细胞的抗肿瘤活性。