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第一部分循环及胎盘、肾脏局部血管紧张素Ⅱ及其1型受体在子痫前期大鼠中的表达及在蛋白尿产生中的作用背景:蛋白尿及肾功能损伤作为子痫前期的重要临床表现,其机制目前并不清楚。已知肾素—血管紧张素系统(RAS)异常,能够改变全身血流动力学,调节全身水钠代谢,调节血压,尤其是肾脏局部RAS的激活,对于许多慢性肾脏病蛋白尿产生及肾小球硬化等方面具有重要意义。目前研究发现,胎盘异常RAS激活可能参与子痫前期的发生,而循环RAS系统,尤其肾脏局部RAS状况及其在肾脏损伤及蛋白尿产生过程中的作用仍不明确。目的:通过制备子痫前期大鼠模型,观察循环系统及胎盘、肾脏局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其1型受体(AT1)在子痫前期大鼠模型中的表达。方法:采用一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)制备大鼠子痫前期模型,分别比较正常雌性组大鼠、正常妊娠组大鼠、未孕L-NAME对照组与子痫前期大鼠尾动脉收缩压(SBP)、24小时尿蛋白定量,肝、肾功能,并对各组大鼠肾组织进行光镜及电镜检查。ELISA法和放射性免疫法分别测定各组大鼠血浆及肾脏局部匀浆液AngⅡ水平,应用Western blot检测大鼠胎盘局部AT1表达,免疫组织化学法及Western blot测定大鼠肾脏局部AT1的表达。结果:在L-NAME处理组大鼠中,SBP及24小时尿蛋白定量均较对照组显著升高(P＜0.05),肝、肾功能无明显差异,电镜及光镜检查符合子痫前期肾脏病理学改变,子痫前期动物模型制备成功。子痫前期大鼠血浆AngⅡ显著高于正常妊娠组及正常雌性组(0.7058±0.130 vs 0.5398±0.055 vs 0.3663±0.123pg/ml,P＜0.05);胎盘局部AT1表达比正常妊娠组升高46%(0.4717±0.04981vs 0.3199±0.03144,P＜0.05);肾脏局部AngⅡ明显低于正常妊娠组(65.543±40.634 vs 165.543±33.078 pg/mg,P＜0.05),肾脏AT1表达减少,仅为正常雌性组、正常妊娠组及未孕L-NAME对照组的54.9%、55.0%及62.1%(0.5535±0.1349 vs 1.0261±0.1402 vs 1.0073±0.1266 vs 0.8908±0.0828,P＜0.01)。子痫前期大鼠24小时尿蛋白量与血浆AngⅡ呈正相关(r=0.791,P＜0.05),而与肾脏局部AngⅡ无相关性。结论:子痫前期中,胎盘局部RAS表达增强,循环AngⅡ表达增高,肾脏局部AngⅡ及AT1表达减少,局部RAS抑制,这种变化与肾损伤及蛋白尿的关系有待于进一步研究。第二部分血管内皮生长因子及其受体在子痫前期大鼠蛋白尿产生中的作用背景:血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR:Flt-1、Flk-1)系统表达的异常可以引起肾小球滤过膜对血浆蛋白的通透性增加,导致蛋白尿的形成。研究已经证实,在糖尿病肾病及多种慢性肾小球疾病蛋白尿的产生中,肾脏局部VEGF及其受体系统的异常起到了重要作用。在子痫前期患者,循环sFlt-1升高,游离VEGF降低,并与疾病严重程度及蛋白尿量呈正相关,提示VEGF和sFlt-1的改变在子痫前期发病机制中有重要意义。但肾脏局部VEGF-VEGFR表达及与蛋白尿的关系有待于进一步研究。目的:通过制备子痫前期大鼠模型,观察血管内皮生长因子及其受体在子痫前期大鼠肾脏中的表达,并探讨其在子痫前期蛋白尿产生中的作用。方法:采用一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)制备大鼠子痫前期模型,Westernblot方法分析正常妊娠组与子痫前期组胎盘局部VEGF表达,Western blot及免疫组织化学法分别比较正常雌性大鼠、正常妊娠大鼠、未孕L-NAME对照组与子痫前期大鼠肾脏局部血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体1型及2型(Flt-1,Flk-1)在各组大鼠肾脏中的表达,并运用图象分析软件分析免疫组化结果。结果:Western blot证实:子痫前期大鼠胎盘VEGF表达(1.7691±0.2707)较正常妊娠组(0.7155±0.2045)明显减低,仅为正常妊娠组的40%(P＜0.05),而与正常雌性组、正常妊娠组及未孕L-NAME对照组比较,肾脏VEGF表达显著增高(1.5429±0.0898 vs 1.1870±0.1160 vs 1.3741±0.1165 vs 1.0155±0.0742,P＜0.01),正常雌性组与正常妊娠组之间差异无统计学意义。免疫组化半定量分析发现,与各对照组相比,子痫前期组肾脏局部Flt-1表达较其他三组对照组分别升高77%、71%及19%,肾脏局部Flk-1表达明显高于各对照组(0.7090±0.0421 vs 0.3999±0.0162 vs 0.4315±0.0224 vs 0.5973±0.0580,P＜0.05)。Western blot显示子痫前期组Flt-1表达显著增强(1.2953±0.1373 vs 0.3019±0.0214 vs 0.4455±0.0501,0.2752±0.0137,P＜0.05),肾脏Flk-1表达分别为其他三个对照组的4.29倍、2.91倍及4.71倍。肾脏局部VEGF(r=0.452,P＜0.05)、Flt-1(r=0.625,P＜0.01)、Flk-1(r=0.633,P＜0.01)与24小时尿蛋白定量均呈正相关。结论:子痫前期大鼠胎盘局部血管内皮生长因子(VEGF)表达降低,肾脏局部血管内皮生长因子及其受体(VEGFR:Flt-1、Flk-1)均表达增强,VEGF-VEGFR系统激活。肾脏局部VEGF-VEGFR激活与24小时尿蛋白量呈正相关。