【摘 要】
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同型半胱氨酸(Hcy)升高是AS发生的一个独立的、重要的危险因素.该实验利用VSMC体外培养的方法,从蛋白和基因水平探讨Hcy对VSMC胶原代谢的影响,以揭示Hcy致AS的发病机制.采用
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同型半胱氨酸(Hcy)升高是AS发生的一个独立的、重要的危险因素.该实验利用VSMC体外培养的方法,从蛋白和基因水平探讨Hcy对VSMC胶原代谢的影响,以揭示Hcy致AS的发病机制.采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC,并通过抗α-平滑肌肌动蛋白免疫组织化学染色和电镜观察进行细胞鉴定,证明用该实验方法所得到的细胞绝大多数为SMC.检测不同浓度Hcy作用48小时VSMC培养液中羟脯氨酸和Ⅰ型胶原含量,发现Hcy使培养液中胶原蛋白含量增加,并有剂量依赖效应.<3>H-脯氨酸掺入实验发现Hcy使VSMC<3>H-脯氨酸掺入量增加,促进胶原合成;应用Western blot技术和酶谱分析法,观察到Hcy使对胶原降解起重要作用的MMP-1分泌减少,活性降低,并且增加其特异性抑制物TIMP-1的分泌.通过半定量RT-PCR证明Hcy从转录水平调节VSMC的胶原代谢,表现为上调α<,1>[Ⅰ]型和α<,1>[Ⅲ]型胶原mRNA的表达,促进胶原合成;下调MMP-1 mRNA的表达和上调TIMP-1 mRNA的表达,从而减少MMP-1的合成并增加其抑制物TIMP-1的表达,减少胶原降解.Hcy在0.1-1.0mmol/L浓度范围内,有剂量依赖效应.上述实验结果证明,Hcy促进VSMC胶原合成,抑制胶原降解,从而导致胶原积聚,可能是Hcy致AS的重要病理机制.
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