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H9亚型AIV近年在我国部分地区广泛流行，给养禽业造成了严重的经济损失。油乳剂全病毒灭活苗虽对该亚型禽流感的控制发挥了重要作用，但却存在生产成本高，疫苗使用后会严重影响禽流感疫情监测等缺点。为了研制新一代安全、高效、使用方便的基因工程疫苗，本试验利用人工合成的强启动子Ps构建了高效表达AIV HA基因的重组鸡痘病毒（rFPV-Ps-HA），进行了初步的免疫效力试验，与痘苗病毒P7.5启动子调控表达相同基因的重组鸡痘病毒（rFPV-P7.5-HA）以及油乳剂灭活苗进行了比较，确定了其应用价值。现将主要研究内容概述如下： 1．高效表达AIV HA基因的重组鸡痘病毒的构建 pUC18HA和SK质粒经HindⅢ，Kpn Ⅰ双酶切后连接得中间质粒SKHA；将质粒SKHA用BamH Ⅰ酶切回收1.7kbHA基因，插入到高效表达插入载体中得高效表达转移载体pFG11SHA,利用FuGENETM6介导的方法将转移载体转染由亲本禽痘病毒282E4感染的鸡胚成纤维细胞。经蓝白斑筛选、纯化重组病毒，经PCR及间接免疫荧光试验鉴定，得高效表达H9A基因且遗传性状稳定的重组病毒rFPV-Ps-HA。 2．rFPV-Ps-HA的免疫效力试验 将SPF白来航鸡随机分组，按试验设计将rFPV-P7.5-HA、rFPV-Ps-HA以及油乳剂灭活苗以颈部皮下注射1日龄鸡，15日龄以H9亚型AIV F株翅静脉攻毒。攻毒后进行采样，分离病毒，统计疫苗的免疫保护指数，检测泄殖腔、气管的排毒规律。 （1）．rFPV-Ps-HA的免疫效力试验 扬州大学硕士学位论文三 在sPF鸡的免疫保护试验中，10，PFu:FPv一P7.5一队的Px为52.4，10，PFurFPV一Ps一HA为94.7，与油乳剂灭活苗免疫效力相当，均高于:FPV一P7.5HA。证明构建的高效表达AIV HA基因的重组鸡痘病毒确实可提高免疫效力。 （2）.泄殖腔、气管排毒规律的检测 rFPV一Ps一HA疫苗组不论是从泄殖腔还是从气管途径，均能有效地抑制病毒的排出。并且通过对SPF鸡的攻毒试验可以看出，泄殖腔的排毒率要高于气管的排毒率。因此，通常可采用泄殖腔排毒率作为评价疫苗保护效力的一个指标。 综上所述，本试验构建了高效表达Hg亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒rFPV一Ps一HA，并对它进行了免疫效力试验，发现在相同条件下，rFPV一Ps一HA的免疫效力高于rFPV一P7.5.HA，与油乳剂灭活苗相当。降低了生产成本，为重组疫苗的推广应用奠定了基础。