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本研究利用重叠延伸PCR法克隆出人脂联素（ADPN）基因cDNA序列,构建了其克隆载体pGEM-T-ADPN。通过测序对其进行序列分析后,进一步构建其毕赤酵母表达载体pPIC3.5K-ADPN,然后利用电击法转化毕赤酵母GS115,经甲醇诱导重组酵母表达,并对表达产物进行分析和研究,取得了如下进展:利用重叠延伸PCR法从人血液中扩增出人脂联素基因第二外显子和第三外显子编码序列,并准确拼接,构建了克隆载体pGEM-T-ADPN。通过PCR和酶切初步鉴定正确后,对其进行测序,测序结果和NCBI中登陆号为NM004797.2的人脂联素cDNA序列比对,结果完全一致,同源性为100%。表明人脂联素基因已经成功克隆并连接至克隆载体pGEM-T中。设计分别带有BamH I和EcoR I两个酶切位点的人脂联素基因引物,以pGEM-T-ADPN为模板,扩增出5′端和3′端分别带有BamH I和EcoR I两酶切位点的ADPN基因,然后用这两种酶切后连接至毕赤酵母表达载体pPIC3.5K中。重组表达载体pPIC3.5K-ADPN转化大肠杆菌DH5α并利用其上携带的氨苄青霉素抗性基因筛选出抗性菌株,然后做PCR及双酶切鉴定。经鉴定人脂联素基因已经准确地连接到毕赤酵母表达载体pPIC3.5K中。用电转化法将重组酵母表达载体pPIC3.5K-ADPN导入甲醇型酵母（P.pastoris）菌株GS115中,获得转化子。将转化子采用营养缺陷、遗传霉素、PCR、Soutern杂交筛选后,得到多株重组酵母菌株。在以甲醇为唯一碳源的培养基上培养,对重组酵母菌株进行了诱导表达。经SDS-PAGE和Western杂交检测人脂联素蛋白表达情况,结果表明:经1%甲醇诱导后,在28 kDa处有目的蛋白条带出现,且甲醇诱导48 h后目的蛋白表达量最高。说明P.pastoris成功表达了人脂联素蛋白且表达的蛋白具有抗原性。