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前言皮肤衰老是内源性因素和外源性环境因素共同作用的结果。紫外线是导致皮肤老化的最重要的外源性因素。光老化临床表现为皮肤干燥、皱纹、变薄、色素沉着及各种皮肤良、恶性肿瘤,如日光性角化病、鳞状细胞癌等,其中尤以皮肤干燥和皱纹最早发生。日光中紫外线主要由中波紫外线（ultraviolet B,UVB,290-320nm）和长波紫外线构成,前者大部分被表皮吸收,主要作用于角质形成细胞（KC）,刺激前炎症细胞因子释放,降低水通道蛋白（aquaporin）的表达,致皮肤干燥脱水以及一系列的光老化表现。KC不仅维持皮肤结构和功能的完整,而且可以分泌多种细胞因子。未受紫外线辐射的KC,细胞因子产生极少。当UVB照射后,KC产生多种细胞因子和炎症介质,其中IL-1α等炎症介质还与UVB照射有剂量依赖性关系。UVB照射后,KC aquaporin3的表达降低,引起皮肤脱水干燥。细胞因子和aquaporin3共同对皮肤光老化的发生发展起到重要作用。水通道蛋白（aquaporins,AQPs）是一组与水、甘油及部分小分子物质跨膜转运相关的细胞膜转运蛋白。目前已发现13种水通道蛋白亚型,按顺序分别命名为AQP0～12,它们构成AQPs家族。水通蛋白中AQP1、AQP2、、AQP4、AQP5和AQP8主要参与水的选择性转运;AQP3、AQP7、AQP9和AQP10主要参于水和非极性小分子物质如甘油、尿素等的转运。1994年Ishibashi等发现和鉴定了AQP3。AQP3表达于包括皮肤在内的多种组织和器官。正常表皮KC仅在基底细胞层表达AQP3。AQP3为上皮细胞膜提供一个孔道,保持细胞内渗透压和细胞容积,在水的转运中发挥作用。AQP3的甘油转运功能对皮肤的水合作用,弹性保持及损伤后的修复功能起着关键性作用。AQPs还参与了多种其他病理生理过程,如上皮系统的通道作用（水分子及甘油、尿素等其它小分子）、脑水肿、细胞迁移、神经信号转导作用等。植物提取物尤其中草药,基于其含有的多种生物活性成分,如多糖、黄酮、微量元素、维生素、激素及类激素等,在延缓皮肤衰老、抵抗光老化方面有确实的疗效。康莱特（KLT）是中药苡仁采用临界萃取技术获得的油状物的乳化剂,临床及试验研究证实其具有抗肿瘤作用。近来发现KLT还可以抑制环氧脂合酶以及核因子（NF-κB）的表达,进而抑制基质金属蛋白酶（MMPs）表达。本研究以体外培养的人永生化角质形成细胞株（HaCaT）为靶细胞。观察UVB照射后HaCaT细胞AQP3表达的变化。观察KLT对HaCaT细胞在UVB照射后的AQP3表达变化的调节。同时观察IL-1α作用后HaCaT细胞AQP3表达水平的变化。初步探讨KLT抗光老化的作用机理和临床应用价值。方法一、细胞培养HaCaT细胞生长于含10%胎牛血清、100U/ml青、链霉素的DMEM培养液中,置5%CO2、37℃培养箱中传代培养。二、MTT比色法测定细胞增殖活性检测KLT对HaCaT细胞增殖抑制的影响。三、实时定量荧光RT-PCR检测（一）检测IL-1α处理后,HaCaT细胞AQP3 mRNA的表达;（二）检测UVB照射后HaCaT细胞AQP3mRNA的表达;（三）检测KLT对UVB照射后HaCaT细胞AQP3 mRNA的表达的影响。四、Western blot分析（一）检测IL-1α处理后,HaCaT细胞AQP3蛋白的表达;（二）检测UVB照射后HaCaT细胞AQP3蛋白的表达;（三）检测KLT对UVB照射后HaCaT细胞AQP3蛋白表达的影响。结果一、MTT结果KLT 120μl/ml时对HaCaT细胞没有明显的增殖抑制作用（p＞0.05）。二、RT-PCR结果（一）UVB照射后HaCaT细胞AQP3 mRNA水平明显下调;随UVB剂量增加该下调作用增强;UVB照射后6 h开始下降,24 h小时达到高峰（p均＜0.001）。（二）KLT作用于UVB照射后的HaCaT细胞,能够明显上调AQP3 mRNA水平,并具有剂量-效应关系;该上调作用随着作用时间的延长而增强（p＜0.0001）;KLT和KLT基质的上调作用的比较有统计学显著性差异（p＜0.001）。（三）IL-1α作用后HaCaT细胞AQP3 mRNA水平明显下调;并具有剂量-效应关系;作用后12 h达到高峰（p＜0.001）。三、Western blot结果（一）UVB照射后HaCaT细胞AQP3水平明显下调;随UVB剂量增加而增强;UVB照射后12 h达到高峰。（二）KLT作用于UVB照射后HaCaT,能够明显上调AQP3水平,并具有剂量-效应关系;该上调作用随着作用时间的延长而增强;和KLT基质的上调作用的比较有明显差异。（三）IL-1α作用后HaCaT细胞AQP3水平明显下调;并具有剂量-效应关系;随时间延长,作用后6 h达到高峰。结论一、IL-1α可以下调HaCaT细胞AQP3 mRNA和蛋白水平的表达,并具有剂量-效应关系。二、UVB可以下调HaCaT细胞AQP3 mRNA和蛋白水平的表达,并具有剂量-效应关系。三、KLT可以上调UVB对HaCaT细胞AQP3 mRNA和蛋白表达水平的抑制,并具有时间/剂量-效应关系。四、KLT对急性UVB损伤有修复作用。