前言 RNAi技术是近年来新兴的、十分有效的干扰细胞基因表达的手段,它能阻滞哺乳动物特异性基因的表达,成剂量依赖性,而且其操作简单、时间短,因此比传统方法(反义核苷酸技术、基因敲除等)能更快更方便地使基因表达沉默或基因表达降低,从而为干细胞相关基因功能的研究提供了更有效的工具。 胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)来源于着床前胚胎的囊胚期内细胞团(inner cell mass,ICM),具有发育全能性。神经细胞被认为是终末分化细胞,其损伤后很难再由自体的神经干细胞补充。研究ESCs向神经细胞分化不仅可以应用于临床,为神经系统疾病,如帕金森症、癫痫、脑卒中等患者进行细胞移植,使其尽快康复;还可以作为研究哺乳动物神经系统发育的体外模型,了解神经分化过程中基因表达调控的变化,并方便进行增减基因操作。直接移植ESCs会有致瘤性,因此体外诱导ESCs向神经细胞分化的纯度、比例是解决细胞移植治疗神经系统疾病临床应用的关键点。 ESCs体外分化很难控制,细胞的特化过程还不清楚,分化步骤也是经验性的,产生的结果多变、细胞混杂。目前常用诱导方法包括使用特异性诱导剂,“五步诱导法",还有尚有争议的基质细胞共培养法,以及基因转染与筛选,但有操作复杂、费用高、毒性大等缺点。本课题组在先前的研究中,通过“序贯诱导法"诱导小鼠ESCs分化为神经细胞,并进行了基因芯片分析。本实验根据基因芯片分析,筛选神经细胞分化主导调控基因,利用RNAi技术对其分化机制进行初步的探讨,探索出一种直接在分子水平上简便有效的体外大比例诱导小鼠ESCs分化为神经细胞的方法。