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内质网应激与肥胖、II型糖尿病、非酒精性脂肪肝等代谢综合症密切相关,在有这些代谢综合症的个体体内都存在着不同程度的慢性内质网应激。FGF21是FGF家族中被新发现的一个分泌型细胞因子,主要在肝脏中表达,需要与辅助受体β-Klotho的结合才能激活其信号通路。近年来大量研究发现,FGF21对于改善各种代谢综合症有着积极的作用。FGF21能促进葡萄糖的吸收,增强胰岛素敏感性,减少脂肪积累,改善肥胖并且能延长寿命。氨基酸饥饿及药物诱导的内质网应激都能激活 FGF21的表达。内质网应激是细胞的一种自我保护机制,在内质网应激下, FGF21的激活可能是用来缓解内质网应激,使细胞免于凋亡。 本研究利用HepG2细胞系,通过细胞转染、实时荧光定量PCR、Western Blotting等实验方法探讨FGF21对内质网应激的调控及可能的机制。研究结果如下: 1.分别使用不同浓度饱和脂肪酸(棕榈酸)刺激HepG2,检测棕榈酸对细胞活力的影响,确定棕榈酸刺激的最佳浓度和时间。结果表明,在250uM的浓度下刺激24小时,活细胞数有70%以上。 2.在250μM和24小时的棕榈酸刺激条件下,检测内质网应激标志基因Grp78、sXBP1、ATF4、CHOP等基因的mRNA及蛋白质的表达量。结果表明,在棕榈酸的刺激下,HepG2发生了内质网应激。 3.在棕榈酸诱导的内质网应激状态下,检测磷脂合成相关基因Chkα、Pemt等基因和 FGF21的 mRNA及蛋白质的表达量。结果表明,在棕榈酸诱导的内质网应激状态下,细胞内磷脂合成被改变,内质网上磷脂合成的稳态被打破,内质网的功能受到损害,FGF21的表达也被激活。 4.在HepG2细胞中超表达FGF21后用棕榈酸刺激诱导内质网应激,检测内质网应激标志基因及磷脂合成相关基因的mRNA及蛋白质的表达量。结果表明,FGF21下调了XBP1的剪切过程、下调ATF4的mRNA表达、下调Grp78的蛋白质表达、抑制了eIF2α的的磷酸化,说明FGF21能一定程度地缓解内质网应激,使磷脂合成恢复稳态。