千金子不同部位生理活性研究及磷酸铈电化学修饰电极的制备

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千金子(Euphorbia lathyris L),续随子干燥成熟种子,是一种毒性中药,具有泻下逐水,破血消癥之功效,外用具有疗癣蚀疣之功效。研究表明千金子中含脂肪油、二萜类化合物、黄酮类化合物及少量的香豆素和挥发油等。但目前针对千金子的研究多仅限于其所含的某一个化合物。为深入开发千金子,对其进行深入和系统研究就有着非常重要的现实意义。基于上述考虑,本论文进行了以下几方面的工作:1)基于细胞代谢组学筛选千金子不同部位抗宫颈癌活性成分。采用乙醇超声波提取法制得千金子乙醇总浸膏(QJZ-E);干法上样后,经正相硅胶柱层析粗分,得到四个具有不同极性的部位QJZ-E14。以宫颈癌细胞(Hela cell)为对象,分别给药(QJZ-E、QJZ-E14),控制给药浓度和给药时间,液氮淬灭。细胞实验结果表明千金子中极性较大的部位(QJZ-E3)对宫颈癌细胞的抑制作用较强,QJZ-E、QJZ-E1、QJZ-E2和QJZ-E4对Hela细胞细胞增殖抑制作用明显低于QJZ-E3。这说明千金子中抗宫颈癌活性成分主要位于QJZ-E3中。采用超高压液相色谱-质谱(UPLC-MS)技术,对上述5个给药及空白对照组Hela细胞提取物进行分析。采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法辨别分析(PLS-DA)对上述样本质谱数据进行生物统计学分析,筛选出可能的抗宫颈癌活性成分。结合数据库检索和文献比对法,对上述筛选出的可能活性成分进行定性分析。鉴定出它们分别为Euphorbia Factor L1、deoxy Euphorbia Factor L1、Euphorbia Factor L3、Euphorbia Factor L8、Euphorbia Factor L15、Euphorbia Factor L16和Euphorbia Factor L25。与文献相比,仅发现Euphorbia Factor L1和Euphorbia Factor L3具有宫颈癌细胞增殖抑制活性,这进一步证实了实验结果的准确性。构效关系初步研究成果表明母核上具有环外双键或环氧环有利于抗宫颈癌活性的提高。上述结果进一步丰富了千金子中抗宫颈癌活性成分库,在一定程度上为抗肿瘤新药的开发提供了理论参考。2)千金子不同部位抗氧化活性研究。以维生素C(Vc)和2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)为参照,分别采用DPPH自由基清除法、ABTS+自由基清除法测定了QJZ-E和QJZ-E14五个部位的抗氧化能力。发现对DPPH自由基的清除能力排序为Vc>QJZ-E3>QJZ-E4>QJZ-E2>QJZ-E>BHT>QJZ-E1。对ABTS+自由基的清除能力其排序与DPPH自由基清除能力相同。上述结果表明,千金子中抗氧化活性成分主要分布于极性较大的部位QJZ-E3和QJZ-E4中。超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS)对上述五个部位进行了分析,共发现了4个黄酮类化合物:青蒿亭、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、山奈酚-3-O-葡萄糖醛酸苷和蔓荆子黄酮,以及3个香豆素类化合物:七叶内酯、瑞香素和双七叶内酯。这些物质主要分布于QJZ-E3和QJZ-E4,与5个部位抗氧化活性顺序正相关。3)磷酸铈纳米管化学修饰电极的制备及应用为保证中药质量,必须对水体中存在的有机污染物实现快速、准确、低成本监测。本章将CePO4纳米管通过Nafion“一步法”固定于玻碳电极表面。利用扫描电子显微镜、透射电子显微镜、粉末X-射线单晶衍射对修饰电极的形貌、元素进行表征,通过循环伏安法和电化学阻抗法对该化学修饰电极CePO4@GCE电化学特征进行了研究,结果表明CePO4纳米管的引入能够大大增加玻碳电极的比表面积,同时加快电子转移速率。利用差分脉冲伏安法检测对苯二酚,线性范围:0.23μM至16 mM,检测范围达到五个数量级,检测限为0.12μM,灵敏度为1.41μAμM-1 cm-2。将该电极进一步用于对苯二酚、邻苯二酚、间苯二酚的同时测定,结果表明CePO4@GCE具有较高的选择性以及较大的线性范围。修饰电极也表现出高重现性和稳定性。将修饰电极应用于实际水样的检测,回收率在95.2107.0%之间,经过高效液相色谱法验证,该方法具有较高的可行性和可靠性。
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