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目的:沉默信息调节因子1(silent information regular1,SIRT1)系sirtuin家族成员之一,是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖的III类组蛋白去乙酰化酶,可参与细胞增殖、凋亡、代谢以及应激反应等生命过程。研究证实SIRT1在多种肿瘤中异常表达且与肿瘤耐药有关。本研究应用靶向SIRT1的RNA干扰慢病毒重组载体分别在细胞水平及动物水平研究SIRT1-shRNA对人宫颈癌Hela细胞移植瘤生长的影响,进一步探讨沉默SIRT1对宫颈癌顺铂敏感性的影响及其与耐药相关蛋白之间的关系。方法:分别构建三个携带不同SIRT1靶点的RNA干扰慢病毒重组载体,感染人宫颈癌Hela细胞,筛选出抑制率最高的RNA干扰慢病毒重组载体用于后续实验。细胞水平试验分为6组:空白Hela细胞对照组、慢病毒阴性对照组、转染试剂polybrene组、SIRT1-shRNA组、顺铂组和SIRT1-shRNA联合顺铂组,CCK-8法测定Hela细胞的增殖抑制率。动物试验采用3~4周龄雌性裸鼠,分为5组:空白Hela细胞组、慢病毒阴性对照组、SIRT1-shRNA组、顺铂组和SIRT1-shRNA联合顺铂组。分别于右侧腋部皮下注射6×10~6个空白Hela细胞悬液、阴性慢病毒感染的Hela细胞悬液及SIRT1-shRNA感染的Hela细胞悬液。造模成功后,待移植瘤瘤体长度达7cm,顺铂组和SIRT1-shRNA联合顺铂组裸鼠腹腔注射顺铂(2mg/kg,200μl),每周两次,共计三周。每3d测量一次裸鼠重量以及瘤体体积,绘制裸鼠肿瘤的生长曲线。顺铂治疗结束后3d,处死裸鼠、称重,剥离裸鼠皮下肿瘤组织并测量和称重。HE染色观察裸鼠肿瘤组织的病理学变化;免疫组织化学染色法观察SIRT1在裸鼠肿瘤组织内的表达;Western blot检测SIRT1以及耐药相关蛋白PARP1、DNA-PKcs和ABCC1的表达。结果:经反复实验优化,SIRT1-shRNA-2号慢病毒载体在MOI=20,polybrene=6μg/ml完全培养基的条件下,细胞感染率>90%,存活率>95%,为慢病毒的最佳感染条件。CCK-8结果显示:与空白Hela细胞对照组相比,polybrene组和慢病毒阴性对照组细胞抑制率分别为5.7%和11.2%,差异没有统计学意义(P>0.05),而SIRT1-shRNA组与顺铂组细胞抑制率分别为65.2%和21.6%,差异具有统计学意义(P<0.05)。体内实验结果证明各组裸鼠移植瘤成瘤率为100%,裸鼠移植瘤曲线结果显示:与空白Hela细胞组瘤体相比,慢病毒阴性对照组差异没有统计学意义(P>0.05),而SIRT1-shRNA与顺铂组瘤体体积均明显缩小(P<0.05),SIRT1-shRNA联合顺铂组裸鼠瘤体的抑制作用最为明显(P<0.05)。HE染色结果显示:在SIRT1-shRNA组、顺铂组和SIRT1-shRNA联合顺铂组中移植瘤细胞出现明显的细胞形态学改变,表现为核固缩、碎裂,肿瘤细胞体积缩小以及出现坏死和凋亡等。免疫组织化学染色法结果显示:在SIRT1-shRNA组和SIRT1-shRNA联合顺铂组中,SIRT1蛋白表达明显下调。Western Blot结果表明:与空白Hela细胞对照组相比,SIRT1-shRNA组和SIRT1-shRNA联合顺铂组SIRT1与ABCC1蛋白表达水平明显下调(P<0.05),而SIRT1-shRNA组、顺铂组和SIRT1-shRNA联合顺铂组PARP1与DNA-PKcs蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论:慢病毒介导靶向SIRT1的shRNA可以显著抑制Hela细胞SIRT1蛋白的表达及Hela细胞的增殖。在裸鼠体内,SIRT1通过上调与宫颈癌耐药相关蛋白PARP1、DNA-PKcs的表达,并下调ABCC1蛋白的表达影响宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性。