经过初期的波动,基因治疗目前已渐趋成熟阶段。有效的基因治疗依赖于外源基因在受体中高效、稳定的表达,而这在很大程度上取决基因治疗所采用的载体系统。慢病毒载体由于其广谱性、低免疫刺激性和稳定表达性,已成为最为理想的基因转移工具。然而,慢病毒载体的一些缺陷严重妨碍其在疾病治疗方面的运用,如慢病毒载体的制备过程复杂,费时费力滴度低,并仍然存在生物安全性问题。本课题的主要工作是改造慢病毒载体,即利用慢病毒的长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)和整合酶,构建一种新型具有稳定表达能力的质粒。该质粒携带绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein gene,EGFP)报告基因,因而在荧光显微镜下可直接观察稳定表达外源基因的细胞。转染Ad293细胞14天后,有些细胞持续表达EGFP,认为该细胞是发生了整合。本研究还利用Southern Blotting和反向PCR,探索质粒的整合及整合位点趋向性。实验结果表明,该质粒有稳定表达外源基因的能力,然而,其整合性尚未得到进一步验证。因此,本研究构建的质粒既有慢病毒载体所具有的稳定表达功能,又克服了慢病毒载体的危险性,以及制备过程中的复杂性,有望在基因治疗中发挥重要作用。