论文部分内容阅读
研究意义大多数疾病都是由遗传因素和环境因素共同作用的结果,不同的基因背景使疾病在不同种族、不同性别等群体间存在不同的发病率和临床表现,也使不同人群对某种疾病的易感性存在差异。中医体质学说认为,体质状态决定发病与否及发病的倾向性,同时,体质对于病证种类、病性、病位、病程和病变趋势等也有重要影响。因此,一些学者认为可以从疾病相关基因表型等为切入点,诠释体质与疾病易感性的有关机理。糖尿病神经病变的西医治疗以控制血糖、营养神经为主,但治疗效果差强人意。采用中西医结合方法,从体质特征、基因多态性角度寻找规律,发掘糖尿病周围神经病变中医不同体质及证候的易感基因,将有助于揭示中医证的内涵,为临床诊疗提供更加准确的信息。研究目的1.研究ApoE基因的多态性与2型糖尿病周围神经病变的相关性;探讨ApoE基因多态性对糖尿病周围神经病变的影响机制。2.分析2型糖尿病周围神经病变人群中医体质分布、证候特征,对体质与证候、体质与ApoE基因分布规律之间的相关性进行探讨,以期为糖尿病周围神经病变中医辨体质-辨病-辨证施治理论提供分子生物学依据。研究方法共纳入514例研究对象,包括355例2型糖尿病患者,其中伴有糖尿病周围神经病变215例(DPN组),病程大于10年仍无糖尿病周围神经病变140例(DM组),同时入选糖代谢正常个体159例作为对照组(NC组)。1.ApoE基因多态性与糖尿病周围神经病变相关性研究(1)检测所选人群的临床指标,并对其血样进行提取、目的基因扩增,应用直接测序法检测ApoE基因多态性。(2)对三组人群ApoE基因型及等位基因的分布进行统计学分析。(3)对DPN组及DM组进行肌电图及血管超声检测,根据是否合并动脉粥样硬化分组,比较各组间ApoE基因型及等位基因的分布,比较各组间运动神经传导速度及感觉神经传导速度。2.糖尿病周围神经病变三阴三阳体质分布特点及其与ApoE基因多态性的相关性研究(1)以赵进喜教授的三阴三阳体质理论为基础,采用既往研究成果中的“三阴三阳体质初量表”,对DPN组及NC组进行三阴三阳体质分布情况的调查;(2)根据世界中医药学会联合会糖尿病专业委员会发布的《糖尿病及其并发症本虚标实证候诊断标准》对DPN组及NC组进行辨证分析统计。(3)对太阴体质、少阴体质糖尿病周围神经病变患者的证候频率分布进行统计,研究三阴三阳体质与证候的相关性。对太阴体质、少阴体质、厥阴体质、阳明体质糖尿病周围神经病变患者的ApoE基因型频率进行统计,研究三阴三阳体质与ApoE基因多态性的相关性。研究结果1.ApoE基因的多态性与2型糖尿病周围神经病变的相关性研究(1)DPN组E4/X基因型(包括基因型E3/E4和E4/E4)频率(28.9%),高于DM组(15.2%)及NC组(18.9%),差异有统计学意义(P=0.003,P=0.026)。DPN组E4等位基因频率(15.7%)高于DM组(8.9%)及NC组(9.7%),差异有统计学意义(P=0.010,P=0.019)。(2)DPN组与NC组相比,E4/X基因型携带者比E3/E3基因型具有较高的DPN患病风险(OR=1.821,95%CI 1.092～3.038,P=0.022),E4等位基因携带者比E3等位基因携带者具有较高的DPN患病风险(OR=1.738,95%CI 1.102～2.743,P=0.017)。DPN组与DM组相比,E4/X基因型携带者比E3/E3基因型具有较高的DPN患病风险(OR=2.374,95%CI 1.348～4.181,P=0.003),E4等位基因携带者比E3等位基因携带者具有较高的DPN患病风险(OR=1.906,95%CI1.168～3.110,P=0.010)。(3)DPN组E2/X、E3/E3、E4/X三个基因组间TC、LDL-C、ApoB水平有显著差异。E4/X基因组的TC、LDL-C、ApoB水平均较E2/X基因组明显升高,差异有统计学意义。DM组三个基因组间TG、HDL-C、ApoB水平有显著差异,E4/X基因组的TG、ApoB水平均较E2/X基因组明显升高,E4/X基因组的HDL-C较E3/E3组及E2/X组降低,差异有统计学意义。(4)Logistic回归分析表明,HbA1c、ApoB、TC、ApoE基因型是DPN发生的危险因素(P<0.05)。HDL-C是DPN的保护因素。(5)根据下肢动脉多普勒超声检查结果,将以上患者进一步分为四组:A组:2型糖尿病组(未合并周围神经病变、未合并动脉粥样硬化)33例;B组:2型糖尿病合并动脉粥样硬化(未合并周围神经病变)107例;C组:2型糖尿病周围神经病变(未合并动脉粥样硬化)30例;D组:2型糖尿病周围神经病变合并动脉硬化组185例。将糖尿病周围神经病变患者组(C+D)与糖尿病未合并周围神经病变组(A+B)的动脉粥样硬化病变率进行比较,差异有统计学意义。(6)A组与B组两组间血脂组分比较,B组的TC较A组升高,差异有统计学意义。B组的HDL-C较A组降低,差异有统计学意义。(7)C组与D组两组间血脂成分比较,D组的TC较C组升高,差异有统计学意义。D组的HDL-C较C组降低,差异有统计学意义。(8)合并动脉粥样硬化组(B+D)与未合并动脉粥样硬化组(A+C)相比,基因型频率差异有统计学意义(P=0.033)。(B+D)的ApoE4基因型频率(25.8%)高于(A+C)的ApoE4基因型频率(12.9%),差异有统计学意义(P=0.030)。(9)各组间运动神经传导速度(MCV)比较,正中神经运动传导速度、胫神经运动传导速度、尺神经运动传导速度有差异。B组的运动神经传导速度均慢于A组,其中正中神经运动传导速度、胫神经运动传导速度差异有统计学意义(P<0.05)。D组的运动神经传导速度均慢于C组,其中胫神经运动传导速度差异有统计学意义(P<0.05)。(10)各组间感觉神经传导速度(SCV)比较,正中神经感觉传导速度、腓神经感觉传导速度、尺神经感觉传导速度有差异。B组的感觉神经传导速度均慢于A组,其中腓神经感觉传导速度差异有统计学意义(P<0.05)。D组的感觉神经传导速度均慢于C组,其中正中神经感觉传导速度、腓神经感觉传导速度差异有统计学意义(P<0.05)。2.糖尿病周围神经病变三阴三阳体质分布特点及其与ApoE基因多态性的相关性研究(1)DPN组单一体质共210例,六大类型按百分比由高到低依次为太阴体质(61例,29.0%),少阴体质(45例,21.4%),厥阴体质(32例,15.2%),阳明体质(31例,14.8%),太阳体质(27例,12.9%),少阳体质(14例,6.7%)。非糖尿病对照组单一体质共150例,六大类型按百分比由高到低依次为太阳体质(66例,44.00%),太阴体质(22例,14.7%),阳明体质(21例,14.0%),少阳体质(14例,9.3%)、厥阴体质(14例,9.3%),少阴体质(13例,8.7%)。对两组按体质类型出现频次进行比较可见太阳体质、少阴体质、太阴体质频次两组有显著性差异。NC组较DPN组太阳体质多,糖尿病周围神经病变组太阴体质及少阴较对照组多。(2)太阴体质类型DPN患者中医证候频率按百分比由大到小出现的次序为:痰湿证(68.9%)>血瘀证(59.0%)>阳虚证(57.4%)>气虚证(52.5%)>阴虚证(41.0%)>水湿证(31.1%)>血虚证(19.7%)>湿热证(18.0%)>气滞证(16.4%)、郁热证(16.4%)、湿浊证(16.4%)>痰热证(11.5%)。两组证候Logistic回归分析显示:痰湿证(B=0.086,OR=2.364)、阳虚证(B=0.980,OR=2.665)、水湿证(B=0.715,OR=2.044)与太阴体质呈正相关。(3)少阴体质类型DPN患者中医证候频率按百分比由大到小出现的次序为:血瘀证(66.7%)>气虚证(64.4%)>阳虚证(55.6%)>痰湿证(46.7%)>湿热证(33.3%)、阴虚证(33.3%)>血虚证(26.6%)>水湿证(24.4%)、>湿浊证(22.2%)>郁热证(17.8%)、气滞证(17.8%)>痰热证(15.6%)>饮停证(2.2%)、肝阳证(2.2%)、结热证(2.2%),热毒证未见。两组证候Logistic回归分析显示:阳虚证(B=0.783,OR=2.187)与少阴体质呈正相关。(4)进一步采用多元逻辑回归分析对高发体质的基因型及等位基因分布进行研究。DPN组与NC组相比,太阴体质E4/X基因型发病风险是E3/E3基因型的2.874倍,太阴体质E4/X基因型发病风险是E2/X基因型的3.017倍。DPN组与NC组相比,E4等位基因发病风险是E3等位基因的2.313倍,E4等位基因发病风险是E2等位基因的3.194倍。研究结论(1)ApoE基因多态性可能与DPN变有关。E4/E4、E3/E4基因型为DPN的易感基因型,E4等位基因携带者更易于发生DPN。ApoE基因多态性可能通过影响糖脂代谢及下肢血管动脉粥样硬化的进展和程度,加速DPN的发生。(2)太阴体质及少阴体质为DPN的易感体质,太阴体质的DPN人群易出现痰湿证、阳虚证及水湿证证候。少阴体质的DPN人群易出现阳虚证候。ApoE位点的突变,E4等位基因及E4/X基因型使太阴体质人群DPN的发病风险增高。基因多态性的检测是本研究的技术关键,中医体质辨识与基因多态性相关性的探讨是本研究的创新点。