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目的:⑴观察eIF4E与Snail在鼻咽癌组织中的表达关系。⑵明确eIF4E在鼻咽癌细胞CNE-2中对Snail mRNA和蛋白表达的调控。⑶观察eIF4E对CNE-2细胞侵袭能力的影响及其分子机制的初步探讨,并尝试以eIF4E为靶点干预鼻咽癌细胞的侵袭活性。
方法:①免疫组织化学方法观察34例鼻咽粘膜慢性炎,65例鼻咽癌病例标本中eIF4E的表达情况;33例鼻咽粘膜慢性炎,67例鼻咽癌病例标本Snail的表达情况。统计分析eIF4E与Snail表达情况的相关性。②稳定敲减或瞬时转染eIF4E表达质粒后,用RT-PCR或Real-time QuantitativeRT-PCR、Western Blot分别检测CNE-2细胞中的eIF4E和Snail的mRNA和蛋白水平。③敲减eIF4E后,Transwell小室观察CNE-2细胞的侵袭活性;在eIF4E高表达状态下,小片段RNAi敲减Snail后观察CNE-2细胞侵袭活性的改变。联合敲减eIF4E和施加顺铂处理,采用Transwell小室观察CNE-2细胞的侵袭活性的改变。
结果:⑴在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽原发癌与转移癌中,eIF4E的阳性表达率分别是11.76%(4/34)、71.87%(23/32)、93.94%(31/33); Snail的阳性表达率分别为15.15%(5/33)、58.80%(20/34)与84.80%(28/33)。在鼻咽原发癌与转移癌组标本中eIF4E与Snail的表达呈正相关,相关系数分别是0.87(P<0.05),0.66(P<0.05)。⑵在CNE-2细胞中eIF4E对Snail的mRNA和蛋白的影响:与空载对照组比较,稳定沉默eIF4E的CNE-2细胞(课题组先前己成功构建,命名为CNE2-EP细胞)中:eIF4E mRNA表达下降80.89%(P<0.05),Snail mRNA表达水平下调60.40%(P<0.05); eIF4E蛋白下调72.69%(P<0.05),Snail蛋白下调47.95%(P<0.05);经基因测序图谱鉴定,成功构建eIF4E表达质粒;经荧光显微镜观察,eIF4E表达质粒瞬时转染CNE-2细胞在培养48h后转染效率较高。在瞬时过表达eIF4E CNE-2细胞(命名为CNE2-OE细胞)中:eIF4E mRNA表达增加191%(P<0.05),Snail mRNA的表达增加99.25%(P<0.05); eIF4E外源性蛋白显著阳性,Snail蛋白表达增加106%(P<0.05)。⑶eIF4E对CNE-2细胞侵袭活性的影响:与对照组比较,敲减eIF4E的CNE-2细胞侵袭活性下降约为41.26%(P<0.05);与对照组比较,过表达eIF4E的CNE-2细胞侵袭活性增加37.88%(P<0.05);与对照组相比,在过表达eIF4E的CNE-2细胞中,敲减Snail后,细胞侵袭活性下降60.59%(P<0.05);与对照组比较,单纯顺铂处理对CNE-2细胞的侵袭活性下降约50.07%(P<0.05);与单纯顺铂处理组比较,联合敲减eIF4E和顺铂处理后,CNE-2细胞侵袭活性下调约22.56%(P<0.05)。
结论:①eIF4E和Snail在鼻咽粘膜慢性炎组织、鼻咽原发癌与转移癌中的表达均呈逐渐升高的趋势且两者呈高度正相关,提示eIF4E和Snail的过度表达可能是促进鼻咽癌浸润转移的重要因素之一,而且两者之间可能存在协作或促进关系。②eIF4E显著提高Snail mRNA和蛋白水平,提示eIF4E促进Snail的转录表达。③eIF4E增强Snail的转录促进鼻咽癌的侵袭转移。④敲减eIF4E显著抑制鼻咽癌细胞的侵袭活性并增强鼻咽癌细胞对顺铂的敏感性。因此,eIF4E是干预鼻咽癌浸润转移的潜在靶点。