目的:研究四妙勇安汤合生脉饮对缺氧/复氧损伤后原代培养乳鼠心肌细胞的影响，探讨四妙勇安汤合生脉饮对缺氧/复氧损伤后原代培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:本研究应用醇沉技术制备四妙勇安汤合生脉饮的药液，采用胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法分离SD乳鼠心肌细胞，采取两次差速贴壁法对心肌细胞进行纯化，原代培养，建立细胞模型，倒置相差显微镜下观察原代培养的心肌细胞，不同时间下对细胞形态拍照并录像，利用免疫细胞化学方法对心肌细胞进行纯度鉴定。利用高纯氮气建立心肌细胞缺氧/复氧模型，制备细胞缺氧用的密闭方盒，自制缺氧盒有进气口和出气口，先用注射器自出气口尽量抽真空，再自进气口向缺氧盒中充高纯氮气30-40min，置换盒中的氧气，关闭缺氧盒的进气口与出气口，缺氧时间4h，复氧时间2h。原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为三组。正常对照组（control group）：不进行缺氧/复氧的处理，不更换培养液，也不加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液进行干预；模型组（model group）：进行缺氧/复氧的处理，更换无糖无血清培养液，但不加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液；药物干预组（treatment group）：进行缺氧/复氧的处理，更换无糖无血清培养液，加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液进行干预。实验开始时正常对照组更换完全培养基入培养箱培养6h；模型组、药物干预组更换无糖无血清培养液，缺氧培养4h，随后模型组更换完全培养基，药物干预组更换含有10%四妙勇安汤合生脉饮醇沉药液的完全培养基，复氧2h，根据不同实验目的用于实验。采用MTT比色法检测心肌细胞存活力，采用全自动生化自动仪检测心肌细胞培养液AST的含量，采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡率，比较各组心肌细胞存活力、AST含量、心肌细胞凋亡率的情况，从而得出四妙勇安汤合生脉饮对心肌细胞凋亡的影响结果。结果:(1)原代培养的乳鼠心肌细胞在倒置相差显微镜下观察，接种时心肌呈悬浮状态，最早在6小时内观察到心肌细胞贴壁并搏动，心肌细胞逐渐伸展为三角状、梭形状、菱形状、多角形状等多种不规则形状，24小时内大部分心肌细胞搏动，但搏动频率不同，48小时后见心肌细胞相互连接，搏动频率趋于一致，第5天见心肌细胞铺展成片搏动频率基本一致，应用免疫组织化学的方法经鉴定为心肌细胞。(2)四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响：①MTT比色法检测心肌细胞存活力：正常对照组OD值为（0.274±0.012），模型组OD值为（0.189±0.020），药物干预组OD值为（0.223±0.018）。模型组与正常对照组比较，OD值明显降低，说明模型组心肌细胞活细胞的数量明显减少，药物干预组与正常对照组比较，OD值也降低，药物干预组与模型组比较，OD值增高，说明药物干预组能提高各孔的OD值，心肌细胞活细胞数量虽然较正常对照组减少，但是较模型组并未减少。经单因素方差分析，模型组、药物干预组与正常对照组比较差异具有显著性(P<0.05)，有统计学意义；药物干预组与模型组比较差异具有显著性，也有统计学意义(P<0.05)；②心肌细胞培养液中天冬氨酸氨基转移酶AST含量的检测：在缺氧/复氧实验结束后，留取正常对照组、模型组、药物干预组各个组心肌细胞培养液样本检测，正常对照组AST含量为（1.02±0.45），模型组AST含量（3.96±0.88），药物干预组AST含量（2.55±0.67），模型组AST含量较正常对照组升高，而在加入四妙勇安汤合生脉饮醇沉药液的药物干预组AST含量较模型组降低，但是较正常对照组仍升高。经单因素方差分析，模型组、药物干预组与正常对照组相比较，差异具有显著性，有统计学意义(P<0.05)；药物干预组与模型组相比较，差异具有显著性，有统计学意义(P<0.05)。③流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡：从FITC和PI荧光标记的双参数点图做统计分析观察到，正常对照组处于正常条件培养的心肌细胞即有细胞凋亡的存在，凋亡率为(13.02±0.65)%；模型组缺氧/复氧条件下培养的心肌细胞凋亡率为(28.56±0.92)%；药物干预组给四妙勇安汤合生脉饮干预的心肌细胞凋亡率为(16.74±0.83)%。经单因素方差分析，各组比较，差异有显著性，具有统计学意义(P<0.05)。结论:四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡具有保护作用，其作用可能与四妙勇安汤合生脉饮能够提高缺氧/复氧损伤后心肌细胞的存活力、能够降低缺氧/复氧损伤后心肌细胞培养液中AST含量有关，改善心肌细胞能量代谢及维持心肌细胞膜结构的完整性和功能的通透性，为了更加详细完善地总结出有关四妙勇安汤合生脉饮对心肌细胞凋亡保护作用的具体机制，尚待进一步研究。四妙勇安汤在保护心肌细胞凋亡方面的作用，为冠心病、心衰的治疗提供新的思路与方法。