海参中呋喃唑酮药残的胶体金免疫层析现场快速检测技术

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近年来,食品安全问题频繁发生,兽药残留尤其是海产品兽药残留问题更是引起了国内外的广泛关注。硝基呋喃类药物是一类人工合成的广谱类抗菌药物,因其具有杀菌效果好、价格便宜等优点,被广泛应用于动物养殖业中,但是硝基呋喃类抗生素的代谢物会在动物体内蓄积,进而对人体造成伤害,所以我国及世界大多数国家都已经将硝基呋喃类药物列为禁用药物。目前,胶体金免疫检测技术在兽药残留的检测中已经形成了自己独特的优势,这就使得与大型仪器分析方法相比,不同海产品的药残分析过程变得简单快速,这一检测方法已经被大范围推广使用。经过多年研究,目前市场上已经推出了对应药残的胶体金免疫检测试剂卡,然而关于这些试剂卡的效能以及如何优化胶体金免疫检测的前处理,做到在实际检测过程中避免有机试剂萃取、多次离心等复杂操作尚无明确的研究和报道。本研究以仿刺参为实验对象,采用高温加热和盐酸酸处理相结合的方法消除海参中蛋白和海参多糖的基质效应,从而省略药物衍生后用有机试剂萃取来消除基质效应这一繁琐的步骤,实现了衍生后直接检测,建立新的前处理方法,使整个检测过程减少对大型仪器的利用率,检测时间缩短到60min以内,并且使胶体金免疫检测的灵敏度达到国家相关标准的要求,从而进一步改善了现有商品化试剂卡普遍存在的前处理不合理的缺陷。主要的研究内容如下:1.探索实验前期的各种因素,包括检测卡的检测性能及在药物衍生后不经提取直接检测的情况下,海参基质对检测结果产生的影响。实验得出结论,当呋喃唑酮代谢物(AOZ)标准液的浓度≥0.25μg/L时,即可出现阳性的检测结果,且稳定性和特异性都良好;海参多糖及其与蛋白质的共同作用为干扰检测的最大基质。2.摸索消除海参基质干扰的最佳条件和方法,确定最佳的前处理方法是将海参样品在衍生前用80℃水浴加热5 min并结合终浓度为0.1 mol/L盐酸处理,可有效消除基质干扰;衍生化条件优化结果为60℃水浴衍生45min时,可以达到理想的检测效果,并使检测时间进一步缩短。最终建立的检测方法对海参中AOZ的检出限为>0.5μg/kg,检测方法的重复性及特异性良好。3.把最终建立的前处理过程在实际海参样本中进行验证。同时采用本实验建立的方法和LC-MS/MS检测方法对同一实际海参样本进行检测。结果显示,建立的方法与LC-MS/MS的符合性良好,都呈现强阳性的结果;优化后的的样品前处理方法可以实现实际样本中AOZ的快速检测。
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