霍山石斛多糖的分离纯化及结构鉴定

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霍山石斛属于兰科,多年生草本植物,主要分布于中国安徽省霍山县,是我国最早有记载的石斛类中药材,具有巨大的药用价值和市场潜力。多糖是霍山石斛中最主要的活性成分之一,研究发现霍山石斛多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗白内障以及提高机体免疫力等作用。本文以霍山石斛为材料,成功分离纯化了一种多糖DHP-W2,对它的结构进行了详细的解析,并对DHP-W2的抗糖基化活性进行了初步的研究。通过不同浓度TCA对多糖脱蛋白率和多糖损失率关系的比较,发现0.5%TCA脱蛋白效果较好且多糖损失率较低,因此采用0.5%TCA对经热水浸提得到的霍山石斛粗多糖进行脱蛋白。霍山石斛粗多糖经DEAE-纤维素离子交换树脂,SephacrylS-200分离纯化得到一单一组分DHP-W2。经高液相凝胶渗透色谱测定其分子量为7.3×104Da。红外光谱扫描分析表明它是典型的多糖类化合物,紫外光谱分析表明其不含蛋白质、核酸等杂质,全水解分析表明DHP-W2主要由葡萄糖(Glc)、木糖(Xyl)和半乳糖(Gal)按1.1:1.0:0.5的分子摩尔比以及少量的半乳糖醛酸组成。甲基化分析和核磁共振波谱分析表明,DHP-W2的主链由1,6-连接和1,4-连接的β-D-glucose组成,分枝点位于O-4/6;DHP-W2的枝链由1,4-连接的α-D-xylose、1,2,4-连结的α-D-xylose以及末端残基α-D-xylose、α-D-galactose和α-D-galacturonicacid组成。对DHP-W2的体外抗蛋白质非酶糖基化活性进行了初步的研究表明DHP-W2具有明显的体外抗蛋白质非酶糖基化活性。
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