乳房炎是影响奶牛养殖业最为严重且最常见的疾病之一,随着抗菌素的长期应用,乳房炎病原菌易产生耐药性,且存在药物在肉品、奶品中的残留等弊端。世界卫生组织也特别强调药物的安全性,提倡回归自然,这都为非传统疗法,尤其是中草药疗法制剂的开发提供了良好机遇。奶牛乳房炎的临床症状主要表现出一些炎性反应,乳房发生明显的炎症是引起乳腺损伤和奶的产量和质量下降的最直接原因。中药防治奶牛乳房炎的剂型主要有散剂、煎剂、注射剂和透皮剂,但都有一定的缺点。其中中药散剂和煎煮后的口服液是临床最常用的剂型,但口服和注射两种给药途径用药时,实际到达乳房组织的有效药物很少,局部药效浓度低,从而无法达到有效的治疗;提取中药的有效成分浓缩制成的软膏透皮制剂,采用涂抹的方式给药,要发挥药效,首先要快速渗透通过皮肤的角质层,使药物在短时间内渗入到乳腺组织,以达到有效血药浓度,无刺激的、和药物有效成分相容性好的透皮制剂辅料筛选难度大,制约了很多透皮制剂的开发。乳房注入剂在预防或防治牛乳房炎时,采用乳池灌注的方式给药,具有计量准确、作用迅速、给药方便的优点,药物不经过消化系统,药效损失少,可直接作用于病原微生物,达到杀菌、抑菌的目的。本文开展了厚朴提取、制剂组方工艺、质量标准确定、抑菌效果、毒理学评价、靶动物(奶牛)安全性试验研究和奶牛乳房炎临床试验等内容,确定最终的可以投入临床使用的奶牛乳房炎制品。为了能更好发挥厚朴总酚的药理作用,本研究将厚朴总酚制成水包油的混悬乳剂,除了保证药效外,还需要制剂能够稳定,符合制定的质量标准的要求。因此,需要对所用的辅料及制备工艺进行系统的研究,保证制剂的安全、有效及质量可控,获得了满足临床使用的厚朴乳房注入剂(泌乳期)。本研究首先对厚朴总酚提取工艺进行研究。经过不同粉碎粒度、提取次数的筛选,确定将厚朴药材粉碎成20目以下,采用乙醇进行3次提取,乙醇用量为药材重量的5倍,使用浓度为60%,每次提取2h,提取温度为60℃,提取时间为2 h/次;醇提取的稠膏过硅胶柱,用石油醚/乙酸乙酯进行梯度洗脱,收集石油醚:乙酸乙酯为100:20和100:25两个流分,在丙酮中进行重结晶,即得厚朴提取物(中间体)。基于厚朴提取物(中间体),我们进行了厚朴乳房注入剂(泌乳期)制剂的工艺研究,通过对厚朴总酚溶解时的溶媒、助溶剂、乳化剂等的筛选,确定了厚朴乳房注入剂的最佳处方和工艺,即整体制剂中油水比例为1.75:1,乳化剂选择司盘-80与聚山梨酯-80,两者比例为4:1,高速均质乳化机的转速达到16000 rpm。对厚朴提取物(中间体)进行了包括性状、鉴别、粒度、外观均匀度、干燥失重、炽灼残渣等检查项、含量等在内的相关质量标准研究;对厚朴乳房注入剂(泌乳期)进行了性状、鉴别、检查和含量等在内的相关质量标准研究,尤其是在含量测定方法的质量标准建立过程中,进行了精密度、专属性、线性等方法学考察。厚朴总酚乳房注入剂能否用于临床的关键在于其临床试验的效果,厚朴总酚的抗菌和抗毒力效果在动物机体能否体现出来,主要通过临床动物试验的结果来反应。本研究开展了厚朴乳房注入剂(泌乳期)临床用药量1倍、3倍、5倍(即每头牛乳池注入20 m L、60 m L、100 m L)剂量,每日2次,连用5天的安全性试验,结果表明,所有动物分别在给药前及给药后第5天、第7天,临床体征、粪便、尿液和乳汁性状均未发生异常,血液生化指标检测,均无显著变化。开展了厚朴乳房注入剂(泌乳期)治疗奶牛乳房炎试验性临床试验,推荐使用方法为泌乳期奶牛每个感染乳区注入20 m L,每日2次(早晚各1次),连用5天。在相同条件下,选用对照药物盐酸头孢噻呋乳房注入剂(泌乳期)(SPECTRAMASTTM?LC),10 m L/支(含盐酸头孢噻呋125 mg)同时进行了相关试验。通过比较发现,厚朴乳房注入剂虽然在降低体细胞速度上比头孢噻呋稍慢,经过5天治疗后,实验组有效率与盐酸头孢噻呋乳房注入剂相当。且厚朴乳房注入剂对奶品质影响更小,更适合临床推广使用。本文通过研究,分别测定了厚朴总酚对四株金黄色葡萄球菌的MIC,厚朴总酚对2株金葡菌的MIC为16μg/m L,远高于对照化药苯唑西林0.25μg/m L的MIC值,但对另外两株金黄色葡萄球菌的MIC为8μg/m L,远低于对照化药苯唑西林128μg/m L的MIC值。同时,测定亚抑菌浓度厚朴总酚抑制金葡菌培养物上清对兔红细胞的溶血活性,结果表明亚抑菌浓度的厚朴总酚能够抑制金葡菌溶血作用,且抑制呈现剂量依赖性。发现厚朴总酚抗细菌感染的新机制,除了抗菌活性外,厚朴总酚尚可抑制金葡菌α-溶血素的表达。从分子水平确证了厚朴总酚的抗菌机制。