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1研究背景三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)是一种有机溶剂,在工业上主要用做金属和电子元件的脱脂、清洗和去污。职业性皮肤接触TCE的工人中出现的严重皮肤损伤已经成为目前国内主要的职业卫生问题。但其皮肤损害的机理尚不清楚,限制了TCE引起的职业性皮肤损伤防治工作的开展。在过去的研究中对其致机体的损伤作用主要集中于对肝脏、肾脏、中枢和末梢神经系统、心脏、生殖系统等器官损伤研究。近年来的研究发现其还可以导致严重的皮肤损伤,许多学者认为TCE造成的皮肤损伤属于T淋巴细胞介导的Ⅳ型迟发性变态反应,然而临床上仅用T淋巴细胞介导的Ⅳ型迟发性变态反应尚不能完全解释其皮肤损伤机制。同时近年来还发现不少死亡病例的病因与严重的肝损伤引起的多脏器功能衰竭有关,因此由TCE致敏引起的肝损伤引起了人们的高度重视,而根据对TCE药疹样皮炎(Dermatitis Medicamentosa-like of Trichloroethylene,DMLT)的病例的资料调查后发现,TCE药疹样皮炎的病人常常伴有严重肝损伤,而肝损伤是引起多脏器衰竭导致死亡的主要原因。由于仅用T淋巴细胞介导的Ⅳ型迟发性变态反应不能完全解释TCE所致皮肤损伤的机制,表明TCE所致药疹样皮肤损伤可能并非只是T淋巴细胞介导的Ⅳ型迟发性变态反应。为此,本研究通过整体动物试验,观察TCE对豚鼠的致敏试验中豚鼠肝功能相关指标、脏器系数的变化、豚鼠肝脏组织病理切片;豚鼠单核淋巴细胞(PBMC)中可溶性多功能蛋白质β-arrestin表达水平、转录因子核因子-κB(NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)的活性,探讨TCE对豚鼠的皮肤致敏作用,并导致的严重肝脏损害,初步研究豚鼠致敏免疫反应调节机制。2研究目的通过观察豚鼠肝功能相关指标、脏器系数的变化、豚鼠肝脏组织病理切片;比较豚鼠PBMC中β-arrestin表达水平、NF-κB、AP-1的活性,探讨TCE对豚鼠的皮肤致敏作用,并导致的严重肝脏损害,初步研究豚鼠致敏免疫反应调节机制。为防治TCE药疹样皮炎及其引起肝脏损伤提供理论依据。3研究方法选用体重250-300 g/只的白色雌性豚鼠,经适应性饲养一星期后,用电动剃刀去除背部毛,约4×6 cm,24h后取皮肤完整无损伤的动物随机分成空白对照组、TCE处理组和DNCB处理阳性对照组。豚鼠背部从头向尾设L1、R1;L2、R2;L3、R3共3对6个点,各点间距1.5 cm,各对间距3 cm。L1、R1两点注射0.1ml弗氏完全佐剂(FCA);L2、R2两点注射0.1ml受试物;L3、R3两点注射0.1mlFCA与受试物的等量混合物。处理组第1d用5% TCE(TCE:橄榄油=5:95)或0.25% DNCB(DNCB:丙酮:橄榄油=1:3:397)皮内注射进行初次致敏,空白对照组L1、R1两点注射FCA,L2、R2两点为生理盐水,L3、R3两点则用1:1(V/V)FCA/生理盐水。第7天在注射部位涂抹10%十二烷基硫酸钠(SDS),于第8d用40% TCE涂皮和0.50% DNCB涂皮进行第二次致敏,48h后用生理盐水清洗,在第15d用20% TCE涂皮和0.25% DNCB涂皮进行激发,24h后用生理盐水清洗。依据《化学品毒性鉴定技术规范》(卫监督发【2005】272号)观察和记录受试区皮肤反应情况并进行拍照。按表1对皮肤反应进行评分。当受试样品组动物皮肤反应积分≥1时,应判为皮肤致敏反应阳性,按表2对受试样品进行致敏强度分级。根据实验目的不同,对豚鼠采取抗凝血提取PBMC,和非抗凝血用于制备血清。PBMC中β-arrestin表达水平用Western Blotting方法检测;NF-κB、AP-1的活性用EMSA方法检测;在自动生化仪上测定与肝功能相关的指标,包括ALT、AST等指标,分析豚鼠脏器系数变化、肝脏组织病理切片。用SPSS12.0统计软件包对实验结果进行统计分析。4结果1、在豚鼠致敏反应试验中,空白对照组未见红斑或水肿,DNCB阳性对照组7只动物均出现红斑以及水肿反应,致敏率为100%;在TCE实验组的14只动物中有10只出现水肿、红斑,致敏率为71.4%。2、对豚鼠的肝功能检查发现,TCE致敏豚鼠ALT、AST与空白对照组比较明显升高、TCE致敏组豚鼠的ALT、AST比未致敏组豚鼠明显升高,经检验差异有统计学意义;DNCB组和空白组对照组相比,ALT、AST差异无统计学意义。3、各组间豚鼠PBMC中β-arrestin表达水平差异无统计学意义。4、与空白对照组、TCE未致敏组相比,TCE致敏组豚鼠NF-κB活性明显升高,且差异有统计学意义;而TCE致敏组豚鼠AP-1的活性未见明显升高。5结论1、TCE在对豚鼠具有致敏作用,属于强致敏物。2、经TCE致敏豚鼠不仅仅发生了皮肤的损伤,肝脏也出现了一定的损伤,且这种损伤是与TCE的作用有关,是免疫性的。3、在TCE对豚鼠的致敏作用及其免疫反应机制中β-arrestin可能未参与发挥其负调节作用。4、TCE对豚鼠的致敏作用中可能发生了NF-κB的激活,而AP-1未被激活。