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Brpf1基因是TrxG家族中的重要成员,含有C2H2、PHD、Bromodomain以及PWWP四个结构域,在转录表达过程中发挥着重要作用。Brpf2基因是本实验室首次分离获得的Brpf1基因的一种新型转录本,只含有C2H2和PHD结构域,由于选择性剪接导致翻译提前终止,目前还没有该蛋白的任何研究报导。实验室在前期工作中证明了Brpf1、Brpf2基因在RNA水平的表达图谱,并对Brpf1、Brpf2基因进行了简单的生物信息学分析,但对于两蛋白在蛋白表达水平的分布及其空间结构、功能等还不太清楚。基于此,本课题首次在蛋白表达水平检测了Brpf1、Brpf2蛋白的组织分布情况,并利用多种生物信息学方法对Brpf1、Brpf2蛋白的结构和功能进行了更深入的研究。首先,本研究利用Western Blot检测了Brpf1和Brpf2在小鼠睾丸、附睾、心、肝、脾、肾、胚胎、卵巢、子宫9种组织中蛋白水平的表达分布,然后对Brpf1和Brpf2蛋白的二级结构、溶剂可及性、功能位点和蛋白跨膜区域进行了分析,并预测了Brpf1和Brpf2蛋白的三级结构模型。通过研究发现Brpf1和Brpf2在蛋白表达水平上存在着很大的差异性：在模拟的空间结构上Brpf1蛋白呈“D桶”结构,而Brpf2蛋白呈多“发夹”相连的结构,两蛋白除空间构象不同外,还具有不同的蛋白和DNA结合位点。Brpf1蛋白拥有着比Brpf2蛋白更多的甲基化、乙酰化、磷酸化等潜在功能位点,但两个蛋白都没有跨膜区域,都属于胞内蛋白。在前期完成的酵母双杂交实验中,证明了Brpf1、Brpf2蛋白可以和Rhox5蛋白相互作用,并确定了其相互作用的关键结构域。本研究用双荧光共定位方法进一步验证了Brpf1、Brpf2蛋白与Rhox5蛋白的相互作用,及其相互作用的关键结构域。通过研究发现,在哺乳动物细胞中,Brpf2蛋白可以和Rhox5蛋白相互作用,而且其关键结构域为两个PHD结构域,而同样含有两个PHD结构域的Brpf1蛋白则不能与Rhox5蛋白相结合,通过对其空间结构的模拟分析,推测其原因是由于Brpf1蛋白有着与Brpf2蛋白完全不同的空间构象,其PHD结构域完全被包被在内,不能发挥其结合位点的作用而导致Brpf1蛋白不能与Rhox5蛋白相结合。本研究构建了Brpf1和Brpf2在小鼠成纤维细胞NIH3T3中的稳定表达细胞系,同时构建了Brpf1、Brpf2的原核融合蛋白表达系统,并得到其纯化蛋白,为下一步进行Brpf1、Brpf2蛋白功能研究打下了基础。