近年来,随着我国鱼类养殖技术的迅猛发展,高密度集约化的人工养殖已经成为水产养殖业的主流。因此,人们对鱼类优质饲料的需求日益增涨。但是,这种高密度养殖经常导致鱼类病害频繁发生,由此引发的水产养殖中滥用抗生素及生长添加剂等现象比较严重。养殖鱼体内的这些有害残留物不但严重威胁着人类的食品安全,而且能够引发水环境的进一步恶化。因此,目前我国鱼类养殖业亟待研发无毒、无残留、高效促生长的饲料添加剂。前人的相关研究资料表明,芽孢杆菌不仅能有效抑制常见病原菌,还能提高动物消化酶活性并促进动物生长,是一类良好的动物益生菌菌株。本研究依据益生菌筛选的常规方法和芽孢杆菌的判定标准,从热泉中分离得到地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis) KL6株,并对其进行了体外益生性评价、发酵培养基及发酵条件优化,并进一步测定了不同浓度该菌剂对鲤鱼(Cyprinus carpio)生产性能及消化酶活性的实际影响。研究者首先分离纯化得到20株芽孢杆菌,选择其中淀粉酶与蛋白酶活性最高的菌株,经菌落与菌体形态观察、生理生化鉴定和16SrDNA序列分析后,将其定名为地衣芽孢杆菌KL6。本研究进一步对地衣芽孢杆菌KL6进行了抗逆性与益生性的体外评价试验。通过抑菌性试验发现,该菌株对金黄色葡萄球菌有抑制作用,但对大肠杆菌与沙门氏杆菌的抑制作用不明显。在高温耐受性试验中,KL6经85℃处理15min内存活率无显著变化(P>0.05),在处理20min时才比处理15min时存活率下降26.19%(P<0.05),该结果说明KL6菌株高温耐受性较强。KL6菌株经过模拟动物胃液与肠液试验,其活菌数受到模拟胃液pH的影响,随着pH值的降低而显著下降(P<0.05),经pH=4、pH=3、pH=2的模拟胃液处理后存活率分别为50.00%、13.20%、7.33%；经模拟肠液处理4h后存活率为84.40%。该试验表明地衣芽孢杆菌KL6具有作为微生物饲料添加剂的潜力。本研究还运用4因素3水平正交试验和单因素试验对地衣芽孢杆菌KL6培养基及发酵条件进行了优化。结果发现,4种因素对KL6活菌数影响的显著性次序为：MnSO4> NaCl>酵母粉>蛋白胨；对KL6芽孢数影响的显著性次序为：MnSO4>蛋白胨>NaCl>酵母粉。由此认为该菌株培养基的最佳配比为蛋白胨1%、酵母粉0.5％.NaCl1％.25%浓度的硫酸锰0.2%。KL6菌株生长适宜温度为37℃。通过发酵罐放大培养结果确定,该菌株最佳的培养时间为14-16h,获得的菌体数量约101.63×109cfu/mL,芽孢率达到97.11%。以上数据表明地衣芽孢杆菌KL6能够适于高密度液体发酵,本试验为以KL6为基础的微生物饲料添加剂的开发和大规模发酵培养提供了理论依据。另外,本研究还对地衣芽孢杆菌KL6进行了鲤鱼投喂试验,即在基础日粮中添加不同浓度的KL6菌剂饲喂鲤鱼,随后测定不同浓度该菌剂对鲤鱼生产性能及消化酶活性的影响。试验结果表明,当菌剂添加量为0.5%与1.0%时,鲤鱼的增重率、饵料系数与对照组相比差异显著(P<0.05),鲤鱼的平均增重率分别提高了14.35%和15.24%,而饵料系数则分别下降了73.20%和74.54%。在菌剂添加量为0.5%与1.0%的试验组中,鲤鱼的食糜蛋白酶活性与对照组相比分别提高了43.26%和44.05%(P<0.05),且在菌剂添加量为0.5%、1.0%与2.0%时,其食糜淀粉酶活性与对照组相比分别提高了5.45%、5.06%与5.22%(P<0.05)。在饵料中分别添加0.5%、1.0%与2.0%的试验菌剂,鲤鱼在肝胰脏蛋白酶活性方面与对照组相比,分别提高了15.32%、14.23%与12.75%(P<0.05)。在饵料中分别添加1.0%与2.0%试验菌剂,其肠组织蛋白酶活性分别提高了25.16%和25.59%,而添加KL6菌剂对鲤鱼肝胰脏与肠组织淀粉酶活性无显著影响(P>0.05)。这些数据表明地衣芽孢杆菌KL6增强了鲤鱼机体消化酶活性,进而促进了其生长。综上所述,本研究分离到的地衣芽孢杆菌KL6可以作为鱼类规模化养殖中的一种耐高温的菌类饲料添加剂,并且适于高密度的液体发酵和大规模培养。该菌株用于鲤鱼饲喂时的菌剂最适添加量为1.0%,此时它能够明显提高鲤鱼的生产性能和多种消化酶活性。本研究为该菌株作为饲料添加剂应用于鱼类养殖中提供了有价值的理论基础。