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目的:1、从人脑胶质瘤中分离培养脑胶质瘤干细胞,观察并检测其在体外的增殖分化情况,用干细胞标志物CD133初步鉴定,建立人脑肿瘤干细系。2、研究普通脑胶质瘤细胞及其干细胞的放射敏感性差异方法:1、取患者胶质瘤组织,分离成单细胞悬液,接种于含血清的DMEM/F12培养液中首先培育出普通胶质瘤细胞,再将部分胶质瘤细胞置于添加表皮生长因子、碱性成纤维生长因子及B27的无血清培养基中进行培养,使其中的胶质瘤干细胞(BTSCs)克隆增殖;对增殖形成的肿瘤干细胞球进行传代培养,部分克隆球细胞做单克隆培养;另一部分干细胞球接种于含血清培养基,观察其分化现象;利用免疫细胞化学检测脑肿瘤干细胞球特异性标志物CD133的表达。2、直线加速器分别以0、2、6、8、10Gy X线照射胶瘤细胞及BTSCs,然后继续培养36H。流式细胞仪检测上述细胞中CD133+细胞比率;采用MTT法检测细胞的存活情况;平板克隆形成实验检测两种细胞的克隆形成能力。结果:1.细胞体外培养发现:少数肿瘤细胞能够在无血清培养基中存活并悬浮增殖,形成克隆性脑肿瘤干细胞球,传代后脑肿瘤干细胞仍保持很强自我更新和增殖能力,表达特异性标志物CD133。随着照射剂量的增加,BTSCs中CD133+细胞的比例逐渐增加,而普通胶质瘤细中微量的CD133+细胞变化不大(P<0.05)。2.胶质瘤细胞及干细胞在X线照射后,其增殖能力都呈渐降趋势,但胶质瘤干细胞的下降幅度远没有胶质瘤细胞大(P<0.05)。3.克隆形成实验显示:随着照射剂量的增加,普通胶质瘤及胶质瘤干细胞的克隆形成率都在下降,但胶质瘤细胞的同比下降幅度明显较胶质瘤干细胞的大(P<0.05)。结论:1、人脑胶质瘤中可以分离培养出胶质瘤干细胞,cD133是脑肿瘤干细胞重要的重要标记,可以用于脑肿瘤干细胞的鉴定。2、胶质瘤干细胞的放射敏感性明显低于普通胶质瘤细胞。