HIV-1融合抑制剂是以HIV-1包膜蛋白为靶点设计的抗HIV-1病毒药物，通过抑制病毒与人体靶细胞融合来阻止病毒感染。多肽融合抑制剂T20（Fuzeon，Enfuvirtide）是第一个被美国FDA批准上市并应用于临床的HIV-1融合抑制剂。但由于T20药代动力学性质不稳定，对HIV-1耐药株产生耐药性、成本高等缺点，因此寻找药代动力学性质稳定，抗耐药，成本低的药物是开发新的HIV-1融合抑制剂的主要方向。而发现有潜力的融合抑制剂则需要以准确、稳定、可靠的测试方法为支撑。因此，本文以基于荧光素酶报告基因的细胞-细胞融合方法及荧光共振能转移为基础的生化检测方法分别从细胞水平及分子水平对HIV-1融合抑制剂的活性筛选及作用机制进行了研究。细胞-细胞融合测试方法已成为HIV-1融合抑制剂活性评价的重要手段。此方法可较高程度上模拟病毒感染靶细胞的过程，具有安全、可定量检测的优点。本课题组采用TZM-bl细胞和HL2/3细胞两种贴壁细胞进行细胞-细胞融合测试。通过化学发光法对细胞融合后产生的荧光素酶进行检测从而对细胞融合进行定量测定。本文利用此方法对螺旋稳定性多肽、FRET工具肽、共价型多肽融合抑制剂及表面活性剂系列HIV-1融合抑制剂进行了活性评价，实验采用C34和T20进行对照，筛选出数个具有低纳摩尔活性的融合抑制剂。数据表明本方法具有可重复性，对融合敏感的特点。此外，本文还对实验条件进行了优化。荧光共振能转移方法从分子水平进行融合抑制剂的活性筛选及机制研究，该方法具有简便，重复性好，测定周期短，可高通量筛选等优点。相对于细胞-细胞融合测试方法的多靶点检测，荧光共振能转移方法以特定靶点为检测目标，验证抑制剂的作用靶点从而确定其作用机制。本课题组以含有gp41NHR口袋形成区的多肽为靶点，以连有荧光基团与靶点肽匹配的C多肽为探针，加入抑制剂将探针竞争性替换，通过荧光强度变化进行定量检测。本文应用此方法对以gp41NHR口袋形成区为靶点的两个多肽系列进行了检测，得到了多肽抑制膜融合的两种作用机制，即：与gp41NHR口袋形成区的靶点结合抑制膜融合；与gp41NHR口袋形成区靶点结合的同时与gp41上的其他靶点作用抑制膜融合。此外，本文在FRET测试中还筛选出与ADSJ-1具有相近活性的潜在小分子融合抑制剂SZ-Br。以上方法分别从细胞水平与分子水平，从融合的特定生物过程与确定的药物靶点上对HIV-1融合抑制剂进行活性评价与机制研究。两种方法可相互验证，进行艾滋病融合抑制剂的筛选和机制研究。