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目的促孕安怡方是黎烈荣教授在更年安怡方的基础上,针对高龄女性生育力下降化裁而成,在前期临床观察研究已取得较好的疗效的基础上,我们以自然衰老的雌性大鼠（10-12月龄）为初老模型,观察促孕安怡方对初老模型大鼠卵巢储备功能和子宫内膜容受性的影响,并对其机理作初步研究,为促孕安怡方在生育力下降的高龄女性中的临床应用提供实验数据及坚实的理论依据。方法选取自然衰老的10-12月龄的大鼠为研究对象进行造模。将造模成功的大鼠随机分为二组,分别为:初老模型组和初老药物组,另外一组为正常对照组（4-6月龄大鼠）。每组的给药方式如下所示:A组（正常对照组）:灌服等体积纯化水12.73ml/kg,每日1次,连续15日;B组（初老模型组）:灌服等体积纯化水10.82ml/kg,每日1次,连续15日;C组（初老药物组）:灌服促孕安怡方,剂量10.82ml/kg,每日1次,连续共15日;实验包括四个部分。第一部分实验为:初老大鼠模型的建立与评价。通过15天对自然衰老雌性大鼠（10-12月龄）进行阴道脱落细胞涂片观察,选取阴道脱落细胞涂片表现为动情间期延长或动情周期紊乱者作为初老雌性大鼠模型。第二部分实验为:研究促孕安怡方对初老雌性大鼠生殖内分泌调控的影响。各组大鼠分别于给药15日后,麻醉,开腹,腹主动脉取血。用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清抗苗勒氏管激素（AMH）、抑制素B（INH-B）、雌二醇（E2）、促卵泡刺激素（FSH）和促黄体生成素（LH）水平。第三部分实验为:研究促孕安怡方对初老雌性大鼠的卵巢组织形态学及卵巢干细胞因子（SCF）和生长分化因子9（GDF-9）表达的影响。将实验二取血后的大鼠,剖取卵巢组织,称重并计算脏器指数;苏木素-伊红（HE）病理切片,在显微镜下观察卵巢结构,各期卵泡及黄体数目;蛋白质印迹法（Western Blot）检测卵巢干细胞因子（SCF）和生长分化因子9（GDF-9）的蛋白定量表达水平。第四部分实验为:研究促孕安怡方对初老雌性大鼠的子宫内膜组织形态学及对白血病抑制因子（LIF）、HOXA-10mRNA表达的影响。将实验二取血后的大鼠,剖取子宫组织,称重并计算脏器指数;苏木素-伊红（HE）病理切片,在显微镜下观察子宫内膜厚度,腺体数量和结构;制备透射电镜切片,观察胞饮突;免疫组化HRP法测定子宫内膜LIF的表达;实时荧光定量PCR法测HOXA-1OmRNA含量。酶联免疫吸附法（ELISA）,它以免疫学反应为基础,使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。然后洗涤除去多余的游离反应物,通过显色,用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（OD值）,绘制出标准曲线,同时计算出待测定物的浓度。ELISA分为多种方法,本文用双抗夹心法检测大鼠血清AMH、INH-B、FSH和LH,用竞争法检测E2。用苏木素-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE）和免疫组织化学染色法处理标本组织石蜡切片后,在显微镜下观察并记录图像。本文,此法主要用于观察卵巢和子宫内膜的细胞形态及卵巢LIF蛋白的表达。蛋白质印迹法（Western Blot）是把蛋白转移到膜上,再用抗体进行检测的方法。本文主要用此法检测卵巢干细胞因子（SCF）和生长分化因子9（GDF-9）的蛋白定量表达水平。实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）是指一种在DNA扩增反应中,于聚合酶链式反应（PCR）体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测PCR全程,然后用标准曲线对未知模板采取定量分析的方法。本文主要用此法检测子宫内膜HOXA-1OmRNA含量。所有实验的数据结果采用SPSS19.0软件包进行分析,数据资料以（?）形式表示,组间差异性分析采用单因素方差分析方法（One-Way ANOVA）并进行多重比较,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.初老雌性大鼠模型的建立与评价4-6月龄雌性大鼠的阴道脱落细胞涂片均观察到周期出现的规律动情周期。10-12月龄雌性大鼠做阴道脱落细胞涂片观察,可以观察到动情间期延长或动情周期紊乱,但极少数有个体差异性。2.促孕安怡方对初老雌性大鼠生殖内分泌调控的影响促孕安怡方能够提高初老模型大鼠血清抗苗勒氏管激素（AMH）、抑制素B（INH-B）和雌二醇（E2）水平,降低促卵泡刺激素（FSH）和促黄体生成素（LH）水平。初老模型组与正常对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）;初老药物组与初老模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。3.促孕安怡方对初老雌性大鼠的卵巢组织形态学及卵巢干细胞因子（SCF）和生长分化因子9（GDF-9）表达的影响促孕安怡方能够提高初老模型大鼠的卵巢脏器指数和干细胞因子（SCF）及生长分化因子9（GDF-9）的表达,改善卵巢显微结构。初老模型组与正常对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）;初老药物组与初老模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。4.促孕安怡方对初老雌性大鼠的子宫内膜组织形态学及白血病抑制因子（LIF）、HOXA-10mRNA表达的影响促孕安怡方能够提高初老模型大鼠的子宫脏器指数和白血病抑制因子（LIF）及HOXA-10mRNA的表达,改善子宫内膜显微结构并增加胞饮突数量。初老模型组与正常对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）;初老药物组与初老模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论在本实验中,我们发现促孕安怡方能够调控初老模型大鼠血清抗苗勒氏管激素（AMH）、抑制素B（INH-B）、雌二醇（E2）、卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）的水平;上调卵巢干细胞因子（SCF）和生长分化因子9（GDF-9）的表达;增强子宫内膜白血病抑制因子（LIF）和HOXA-10mRNA的表达;改善卵巢和子宫显微结构;从而改善初老模型大鼠的卵巢储备功能和子宫内膜容受性,增强初老雌性大鼠的生育力。