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目的:对目前报道的检测HIV病毒库的两种方法(alu-PCR检测整合型HIV-1DNA和荧光探针PCR检测HIV-1 total DNA)的可靠性、特异性进行评估,选出更加适用于临床检测病毒库的方法。并用横断面样本验证所选方法的可靠性及实用性。方法:(1)使用QIAamp DNA Mini kit试剂盒提取HIV-1感染者的外周血单个核细胞的总DNA;(2)应用2套引物方案验证Alu-PCR检测整合型HIV-1 DNA的特异性;(3)验证荧光探针PCR法检测HIV-1 total DNA的灵敏度、特异度,并用横断面(HIV-1 RNA转阴1~6年以上)的HIV-1感染者的样本,进一步评估荧光探针PCR检测HIV-1 total DNA的可靠性及实用性。结果:(1)alu-PCR检测整合型HIV-1 DNA:20例HIV-1感染者PBMC内的DNA样本,在方案1和方案2第一轮PCR产物的电泳图中均无条带,且扩增产物浓度低,无法完成基因测序。第二轮PCR扩增产物电泳图中,方案1有9例(n=20)样本在240bp处有亮带,其扩增产物基因测序后进行序列比对,其中4例符合整合型HIV-1 DNA片段,5例仅有人的基因组片段,即方案1的第二轮扩增产物中整合HIV DNA片段的阳性检出率为20%(4/20);方案2有12例(n=20)样本在350bp处有亮带,其扩增产物测序后进行序列比对,均有HIV-1 DNA片段而未含有人的基因组片段,即方案2的第二轮扩增产物中HIV DNA片段的阳性检出率为60%(12/20)。(2)本研究的荧光定量PCR检测HIV total DNA实验方法检测的线性范围为50-10~4拷贝/10~6cells;该方法用于检测20例HIV-1感染者PBMC样本,其扩增产物经基因测序后序列比对90%均符合HIV-1 DNA片段,20例样本的HIV DNA阳性检出率为100%;8例健康对照的HIV-1 total DNA的阳性检出率为0,特异性100%。用该方法检测47例横断面的临床样本,未治疗的HIV-1感染者以及HIV-1 RNA阴转后1-2年、3-4年、5-6年的HIV-1感染者PBMC内的HIV-1 total DNA均数分别为(3.24±0.58)、(2.93±0.69)、(2.84±0.55)、(2.53±0.48)log10 copies/10~6 PBMC),总体趋势是HIV-1 RNA阴转时间越长,其HIV-1 total DNA越低。结论:(1)Alu-PCR检测整合型HIV-1 DNA特异性有待进一步验证。(2)荧光探针PCR检测HIV total DNA的方法,敏感性高,特异性好,可行性及实用性强,有望成为临床观察HAATR治疗后,HIV存储库消耗的血清学标记物。