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背景:急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是世界范围内死亡率较高的疾病之一。及时恢复(再灌注)缺血心肌的血流供应成为治疗这些患者的标准疗法。然而在早期阶段再灌注会给心肌组织带来进一步更严重的损伤即缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤。研究发现缺血预适应有着明显的心肌保护作用,但是由于急性心梗的不可预知性其临床应用受到限制。近年来缺血后适应(ischemicpostconditioning,IPostC)由于和预适应有着相似的心肌保护作用以及临床可操作性受到了广泛关注,但其作用机制尚未完全清楚,有必要进一步完善研究。据报道自噬参与心肌I/R的发展过程。也有研究表明自噬受到后适应的调节。再灌注早期大量生成的活性氧(reactive oxygen species,ROS)引发诱导的自噬同时也能够降低ROS水平,减轻氧化应激。我们实验室前期研究发现,神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)参与后适应减轻氧化应激和钙超载,具有抑制I/R损伤的心肌保护作用。后适应能够恢复nNOS活性,其合成的NO影响腺苷单磷酸激活蛋白激酶(adenosine 5‘-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)的活性,从而对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycinm,mTOR)即自噬的关键调节器产生作用。但是自噬、后适应与nNOS之间在缺血再灌注损伤及保护作用中的相互关系尚未明晰。我们推测nNOS可能参与后适应对自噬的调节,后适应可能部分通过nNOS介导的通路促进自噬减轻I/R损伤。目的:研究自噬在后适应心肌保护中的作用,探讨nNOS在缺血后适应调控自噬活性中的作用。方法:随机选择C57/B6雄性小鼠,建立小鼠在体心脏缺血再灌注损伤模型与缺血后适应模型;用缺氧罐建立H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型与缺氧后适应模型;用Western Blot检测组织和细胞样本中各组LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、p62、p-AMPK(Thr172)、p-mTOR、p-nNOS(Ser852)以及nNOS蛋白的表达含量;用透射电镜观察各组样本中自噬体个数及线粒体形态。用共聚焦显微镜观察被GFP-LC3腺病毒转染的各组细胞中自噬体个数;用TTC试剂盒测定心肌梗死面积;利用HE染色对心肌组织结构进行观察测定;利用ROS试剂盒检测细胞中ROS生成量;使用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒测定细胞凋亡率;用CCK-8试剂盒测定细胞活性;用线粒体膜电位检测试剂盒测定各组细胞的线粒体膜电位。结果:1)与I/R组相比,IPostC组nNOS活性恢复。2)后适应增加了自噬体的形成,恢复了受损的自噬流,自噬活性升高;nNOS抑制剂L-VNIO削弱了后适应这一作用。3)与I/R组相比,IPostC组AMPK磷酸化水平进一步增加,mTOR磷酸化水平降低;nNOS抑制剂L-VNIO抑制了后适应这一作用。4)后适应减小了心肌梗死面积,保留了大部分正常的线粒体和心肌结构,自噬抑制剂3-MA取消了后适应这些作用。5)后适应降低了 ROS水平和细胞凋亡率,改善了细胞活性和线粒体膜电位,而自噬抑制剂3-MA抑制了后适应这一作用。结论:后适应可以部分通过激活nNOS/AMPK/mTOR通路增强自噬活性减轻心肌缺血再灌注损伤。