[目的]近年来研究发现星形胶质细胞可以调控神经元兴奋性,甚至参与癫痫发病。CNN3基因编码的calponin-3蛋白是钙/钙调蛋白结合蛋白,在神经元与星形胶质细胞均有表达。前期研究显示calponin-3在耐药性癫痫患者脑组织及慢性癫痫鼠脑内表达异常升高,且可能影响癫痫易感性,但具体作用环节不清。因此,拟区分不同神经细胞类型的calponin-3与癫痫易感性有无差异,明确现有广谱抗癫痫药能否改变癫痫鼠脑内calponin-3及其下游的CAMKII蛋白表达,为进一步探索耐药性癫痫的治疗提供实验依据。[方法]利用syn-CNN3fl+/+以及Gfap-cre+/-转基因鼠进行扩繁,通过PCR技术对其后代小鼠进行基因鉴定,选出syn-CNN3fl+/f+与Gfap-cre+/-基因型小鼠。在立体定位仪引导下,向syn-CNN3fl+/fl+转基因小鼠海马多位点载入syn-cre病毒以选择性敲低海马神经元中的CNN3基因;向Gfap-cre+/-转基因小鼠海马多位点载入 DIO 病毒(HBAAV2/9-CMV-DIO-MIR30-M-CNN3-GFP)以选择性敲低海马星形胶质细胞中的CNN3基因。注入病毒21天后,通过免疫荧光三染与Western Blotting(WB)技术检测神经元与星形胶质细胞中calponin-3蛋白的表达量。确认实验鼠CNN3基因的敲低效率后,再予匹罗卡品腹腔注射构建癫痫持续状态模型,记录选择性敲低神经元/星形胶质细胞鼠与对照鼠出现RacineⅣ级以上行为学的潜伏期,并进行比较。选取健康状况良好的C57小鼠,经腹腔注射匹罗卡品点燃,将48小时后存活且仍有癫痫发作的实验鼠随机分为生理盐水(NS)组、丙戊酸(VAP)组与左乙拉西坦(LEV)组。每天早晚8点分别予生理盐水、450mg/kg的VAP及450mg/kgLEV灌胃;另设置C57小鼠14只,不予匹罗卡品注射,仅予生理盐水灌胃,作为空白(KB)对照组。同时每天观察各组实验鼠的行为学变化,以Rancine评分对癫痫发作进行分级。在开始灌胃1周、2周、3周、4周后,各组随机抽取3只小鼠断头剥离出海马,通过WB实验检测calponin-3和CAMK Ⅱ表达水平,免疫荧光染色观察calponin-3与CAMK Ⅱ在两种神经细胞中的分布与表达变化。[结果]在琼脂糖凝胶电泳上syn-CNN3 fl+/fl+与Gfap-cre+/-基因型的小鼠PCR产物大小与预期引物一致,方可进一步实验。AAV病毒经海马多点注入21天后,WB及免疫荧光显示选择性敲低神经元/星形胶质细胞CNN3基因鼠中海马内神经元/星形胶质细胞内calponin-3表达量较对照组显著降低。各实验鼠注入匹罗卡品后,选择性敲低海马神经元CNN3基因组的癫痫发作潜伏期较对照组延长;而选择性敲低海马星形胶质细胞CNN3基因组的癫痫潜伏期与对照组间无显著性差异。丙戊酸在灌胃癫痫鼠后第二周开始产生抗癫痫效应,而左乙拉西坦在灌胃癫痫鼠后第一周便产生明显抗癫痫效应。与未灌胃抗癫痫药及未点燃的KB组比较,NS组、VAP组与LEV组中calponin-3表达量自灌胃后第一周开始升高,第二周更高,但第三周开始下降,直至第四周,然而,这四周内的calponin-3总表达量水平仍显著高于KB组;这三组CAMK Ⅱ表达量有所不同,NS组CAMK Ⅱ表达量第一周稍有增加,第二周开始持续下降,并低于与KB组;VAP组CAMKⅡ表达量第一周开始持续下降,第三周稍有回升,但总体表达量低于KB组;LEV组CAMK Ⅱ表达量第一周下降,第二周开始持续上升,第三、四周高于KB组。NS组中calponin-3表达量与CAMKⅡ表达量1-3周有相反的趋势,第四周calponin-3表达量开始下降,CAMKⅡ表达量下降程度减慢。VAP组、LEV组中calponin-3表达量没有随着CAMKⅡ表达量的回升变化而变化。[结论]AAV病毒选择性敲低了小鼠海马神经元以及星形胶质细胞中CNN3基因;calponin-3通过神经元作用影响癫痫易感性,而与星形胶质细胞无明显关系。广谱抗癫痫药丙戊酸和左乙拉西坦灌胃4周内均未明显改变癫痫海马中calponin-3表达。CAMKⅡ的表达量随着癫痫反复发作不断降低,随着癫痫发病严重程度的减轻有所回升,VAP可能不会影响CAMKⅡ的表达,但LEV可明显增高CAMKⅡ水平,CAMKⅡ表达量的变化并不影响calponin-3的表达量。本研究发现一个参与癫痫发病可能的新靶点,拓宽对LEV抗癫痫作用的认识。