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目前,全球被乙型肝炎病毒慢性感染的人数超过了3.5亿,35﹪-40﹪的慢性乙型肝炎终将转化为肝硬化或肝癌,每年由乙肝病毒引起的死亡人数超过一百万。中国是乙型病毒性肝炎的高发区,保守估计的乙肝慢性感染人数占全国人口的9﹪以上。HBV急性感染时,机体会发生强烈的细胞和体液免疫应答,其中最主要的是由CD8<+>T和Th1细胞介导的细胞免疫反应,它们可直接杀伤被病毒感染的细胞或通过分泌IFN-γ等细胞因子抑制病毒复制;但是在慢性感染者体内,出现了细胞免疫反应低下或免疫耐受,所以机体不能清除病毒。
第一章乙型肝炎病毒携带者细胞免疫功能和细胞因子的产生了解乙肝病毒诱导机体免疫耐受或免疫功能低下的机制是对乙肝进行有效防治的关键。
目的:探讨HBV病毒携带者细胞免疫功能的状况,以及这种细胞免疫功能状况与体内乙肝病毒相关抗原、IFN-γ、IL-12等细胞因子水平间的关系,从而探讨乙型肝炎病毒感染慢性化的可能机制。
方法;我们用乙肝病毒特异性抗原、非特异性多克隆刺激物及相应的中和抗体等单独或联合作用于不同实验组PBMCs、单核细胞等,用夹心ELISA法检测其细胞培养上清中各种细胞因子水平,统计分析细胞因子之间以及乙肝抗原与细胞因子之间的关系。
结果:HBV病毒携带者PBMCs分泌的Th1型细胞因子,如IL-12P70、IL-12P40等,比健康对照组低;而抑制性细胞因子,如TGF-β等在HBV病毒携带者PBMCs细胞培养上清中升高;同时中和TGF-β和Th2型细胞因子IL-10能提高HBV病毒携带者PBMC的Th1型细胞因子的分泌水平;从PBMC中分离出的单核细胞,它们分泌的IL-12P70、IL-12P40、TNF-α等,在HBV病毒携带者及健康对照组间没有显著性差异。
结论:从我们的结果看来,HBV携带者PBMC分泌的IL-12比健康对照组少;Th1/Th2偏移可能参与了病理机制;而HBV携带者PBMC中的单核细胞功能没有受到损伤。据此,我们在医疗卫生实践中对慢性肝炎进行防治时可以考虑纠正这种Th1/Th2平衡的偏移而对HBV感染者进行干预,以期能打破耐受,促进机体细胞免疫功能而抑制或清除病毒。
第二章外源性IL-12对乙肝病毒携带者细胞免疫功能的影响由于HBV病毒的直接或间接影响,Th1/Th2型细胞因子平衡的偏移,体内IFN-γ、IL-12的合成分泌能力受到部分抑制。
目的:探讨外源性IL-12在体外对乙肝病毒携带者细胞免疫功能的影响及其机制,从而试图通过纠正这种Th1/Th2平衡的偏移而对HBV感染者进行干预,为治疗。HBV患者提供新的思路。
方法:我们用夹心ELISA法检测外源性IL-12和乙肝特异性抗原作用于乙肝病毒携带者PBMCs后细胞培养上清中的IFN-γ水平;用ELISPOT检测能被外源性IL-12协同促进分泌:IFN-γ的抗原特异性T细胞在PBMCs中的频率;用FCS检测能被外源性IL-12和乙肝特异性抗原激活的细胞的表型。
结果:较低浓度的外源性IL-12能明显促进乙肝特异性抗原从乙肝病毒携带者PBMCs中诱导分泌的IFN-γ;IL-12是通过增加IFN-γ分泌细胞的频率来促进PBMCs分泌细胞因子的;IL-12通过活化中央记忆型CD8<+>T细胞来促进细胞免疫功能。
结论:乙肝病毒携带者外周血PBMCs中,乙肝抗原特异性中央记忆型CD8<+>T细胞可能是因为缺少IL-12等细胞因子的刺激而使其功能受到抑制;联合使用乙肝特异性抗原和IL-12可以恢复这些细胞的功能。这就为临床治疗慢性肝炎提出新的思路及实验依据。