【摘 要】
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目的 构建非糖基化、抗凝血酶激活的高分子量尿激酶原突变体。 方法 使用PCR扩增的方法,将302位天冬酰胺(Asn302)突变为丙氨酸(Ala302),去掉糖基化位点;将156位精氨酸(Arg
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目的 构建非糖基化、抗凝血酶激活的高分子量尿激酶原突变体。 方法 使用PCR扩增的方法,将302位天冬酰胺(Asn302)突变为丙氨酸(Ala302),去掉糖基化位点;将156位精氨酸(Arg156)突变为赖氨酸(Lys156),去掉凝血酶作用位点。 结果 PCR产物经琼脂糖电泳鉴定分子量为1296Da(道尔顿,dalton)。突变体与pUC19克隆载体用HindⅢ、XbaⅠ双酶切。二者连接后,转化入DH5α感受态细胞(大肠杆菌)中。用蓝白斑筛选法识别PCR产物是否与pUC19载体连接。包含PCR产物的克隆呈现白色。将白色克隆提质粒送测序。测序正确的基因与pIPES双表达载体连接后备用。 结论 非糖基化抗凝血酶的高分子量尿激酶原突变体构建成功。
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