黄粉虫活性蛋白的提取纯化及其作用性质研究

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黄粉虫因其营养成分高,营养含量居各类活体动物蛋白饲料之首,被誉为“蛋白质饲料宝库”。黄粉虫的养殖逐渐形成规模化,成为蓬勃发展的新兴产业。黄粉虫的利用和开发已达到一定的高度,主要是其生物学特性、饲养管理、食品开发等方面。随着中医药的发展,黄粉虫的药理研究越来越深入,在医疗保健中越来越多地得到应用。   本文从黄粉虫体内提取纯化得到一种活性蛋白,并对其抗血栓和抗癌作用进行了初步的研究。采用硫酸铵盐析法对其蛋白质进行提取,用DEAE-32纤维素层析柱和Sephadex G-75葡聚糖凝胶柱对所分离黄粉虫蛋白粗提液进行纯化,得到相对分子质量约为56.1kD的单一组分蛋白。经检测,黄粉虫活性蛋白具有纤溶活性,每毫克黄粉虫活性蛋白相当于98.03尿激酶国际标准活力单位,其蛋白浓度为7.1066mg.mL-1,糖含量为7.084%。研究了不同物化因子对黄粉虫活性蛋白的影响。Na+和K+对黄粉虫活性蛋白的纤溶活力基本无影响,而Mg2+和Ca2+则对其活力有一定的抑制作用,10mol-mL-1的尿素和1%的巯基乙醇可完全抑制其活力。黄粉虫活性蛋白的最适反应温度为25℃~45℃,最适pH为7.5~8.0。实验采用急性毒性实验对黄粉虫活性蛋白的安全性进行初步研究,结果表明黄粉虫活性蛋白安全。同时对黄粉虫活性蛋白的溶血性做了检测,其溶血率小于5%,不引起体外红细胞的明显溶血,安全性好。对黄粉虫活性蛋白进行体外溶栓实验,结果表明其具有溶栓作用,并且血凝块的溶解率随着黄粉虫活性蛋白浓度的增加而增加。血栓与恶性肿瘤转移关系密切。因此,本文通过黄粉虫活性蛋白对鸡胚尿囊膜新生血管和S180腹水瘤的抑制作用实验,得到两点结论。⑴黄粉虫活性蛋白能使鸡胚尿囊膜血管明显变细、数目变少,能明显抑制新生血管的生成;⑵黄粉虫活性蛋白直接作用于S180腹水瘤,肿瘤细胞数减少,腹水体积减少,效果显著。据此表明它极可能是通过血管生成抑制途径产生体内抑瘤效应的,并且它抑制血管生成的作用与溶栓活性存在一定的相关性。然而它含有的溶栓活性蛋白组分是否有直接杀伤肿瘤细胞的作用,尚待进一步研究。另外,它抑制肿瘤血管增生的具体途径及其机制也还需进一步研究加以证实。最后,实验还对黄粉虫活性蛋白进行了红外吸收检测,结果表明,黄粉虫活性蛋白可能是一种含有糖结构的蛋白质。
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