论文部分内容阅读
近年来研究发现:噪声暴露会引起耳蜗毛细胞呈现两种截然不同的死亡方式----凋亡(Apoptosis)和坏死(Necrosis),而且凋亡和坏死的毛细胞在形成时间的先后以及在损伤区域的分布具有一定的规律性。噪声暴露会引起耳蜗细胞内剧烈的代谢活动,在耳蜗细胞内产生大量活性氧簇(ROS),过量的ROS引起细胞内氧化作用急剧增加,而细胞内氧化状态的改变可能是决定噪声暴露后毛细胞凋亡/坏死的关键因素。在本研究中,我们首先局部应用布替诺林(BSO,谷胱甘肽特异性抑制剂)或还原型谷胱甘肽(GSH)改变耳蜗细胞的氧化状态,之后观察噪声暴露诱发毛细胞死亡方式的变化。结果如下:一、经底回鼓阶-后半规管径路耳蜗灌流给药新方法的应用与探讨为使药物快速进入耳蜗,并能够均匀分布于耳蜗各回,我们在传统的耳蜗灌流技术基础上创立了一种新的经底回鼓阶-后半规管径路活体灌流给药的新方法。分别在耳蜗底回距离圆窗膜约2.0mm处以及后半规管各钻一直径约0.20mm的小孔,用微量注射泵以1μl/min速度将10μl人工外淋巴液自鼓阶钻孔注入,液体自后半规管钻孔流出。灌流结束后封闭钻孔以及听泡骨窗。术前、术后听力检测显示:1K,2K,4K等频率手术前、后ABR阈值差异无统计学意义;8K,16K等频率术后即刻ABR阈值增高约10dB,4h后明显恢复(与术前比较差异无统计学意义)。碘化丙啶(PI)染色后全耳蜗基底膜铺片观察未见毛细胞凋亡、坏死及缺失。二、BSO、GSH耳蜗局部应用后对灰鼠听功能及耳蜗细胞形态的影响两组灰鼠,每组10只,利用前述的活体耳蜗灌流给药技术,分别将10μl60mM的BSO溶液(BSO组)或10μl 10mM的GSH溶液(GSH组)注入动物右侧耳蜗(实验耳),左侧(对照耳)注入等量的人工外淋巴液。给药后4h(BSO组)、30min(GSH组)分别检测两组动物ABR阈值变化、耳蜗细胞内GSH水平变化,并利用基底膜铺片技术观察药物本身是否会造成急性毛细胞损伤。结果显示:BSO组中实验耳GSH水平、GSH/GSSG比例较对照耳明显降低;GSH组中实验耳GSH水平、GSH/GSSG比例较对照耳明显升高,差异均具有统计学意义(p＜0.05)。BSO、GSH本身并未引起听力改变,也未引起急性毛细胞损伤。三、耳蜗细胞内氧化状态的改变对噪声诱发毛细胞死亡方式的影响20只灰鼠平均分为两组,按照第二部分中的方法处理后,将动物暴露于中心频率4kHz,强度117dB的窄带噪声2h。两组动物于噪声暴露结束后4h,取两侧耳蜗进行PI染色、基底膜铺片,然后分别计数凋亡、坏死、缺失的毛细胞数目。结果显示:1、两组中,实验耳与对照耳的损伤程度(凋亡、坏死及缺失毛细胞之和)接近,差异无统计学意义(p＞0.05);2、BSO组中实验耳坏死/凋亡细胞比例(N/A Ratio)明显高于对照耳,两者比较差异有统计学意义(p＜0.05);而GSH组中实验耳N/A Ratio则明显少于对照耳,两者比较差异有统计学意义(p＜0.05)。结果提示耳蜗细胞内氧化状态的不同是决定噪声暴诱发毛细胞不同死亡方式的关键原因。