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海洋真菌是海洋天然产物的重要来源,到目前为止,已经从中分离鉴定了1000多个新化合物,其中大部分具有良好的抗肿瘤、抗菌、抗病毒等生物活性。本文对5株海洋真菌的次级代谢产物进行了化学成分及生物活性的研究。
从中国南海海底沉积物中分离获得约150多株海洋真菌,通过抗菌、卤虫致死、抗肿瘤细胞活性、HPLC-UV等生物与化学组合筛选模型,得到活性菌株,从中挑选青霉属真菌Penicillium sp.F07、炭角属真菌xylaria sp.SOF11、青霉属真菌Penicillium sp.F12、虫草属真菌Cordyceps memorabilis F115以及深海来源炭角属真菌Xylaria sp.SCSI0156作为本文研究对象,对5株活性菌株进行发酵培养基的优化以及多种培养方式的探索。其中,青霉属真菌Penicillium sp.F07采用大米固体发酵比PDA液体振荡培养时次级代谢产物更为丰富;采用大米固体发酵时,青霉属真菌Penicillium sp.F12产生完全不同于PDA液体振荡的次级代谢产物;在添加有机氮源的情况下,虫草属真菌Cordyceps memorabilis F115的环肽类化合物的表达有明显的改善。
采用常规的硅胶柱层析、中压反相制备层析,葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析、高效液相色谱以及重结晶等分离纯化手段,对五株海洋真菌的发酵提取物进行系统的分离,分离到单体化合物72个。
从海洋真菌Xylaria sp.SOF11的发酵提取物中分离到25个化合物,根据理化性质和波谱数据鉴定了15个化合物,分别为:6,7-hydroxy-19,20-epoxycytochalasin Q(1),19,20-epoxycytochalasin Q(2),18-deoxy-19,20-epoxycytochalasin Q(3),18-deoxy-19,20-epoxycytochalasin Q(4),bassianolide(5),过氧麦角甾醇(6),麦角甾醇(7),9,20-epoxycytochahsin D(8),cytochalasin P(9),19,20-epoxycytochalasin N(10),clonostachydiol(11),cytochalasin D(12),18-deoxycytochalasin Q(13),zygosporin G(14)和cytochalasinQ(15)。
从海洋真菌Penicillium sp.F12的发酵提取物中分离到16个化合物,根据理化性质和波谱数据鉴定了7个化合物,分别为:brefeldin A(16),paspalinine(17),13-desoxypaxilline(18),paspaline(19),verruculogen(20),fumitremorgin B(21)和fumitremorgin A(22)。
从海洋真菌Xylaria sp.SCSIO156的发酵提取物中分离到10个化合物,根据理化性质和波谱数据鉴定了7个化合物,分别为18-deoxycytochalasin Q(23),deacetylcytochalasin Q(24),cytochalasin Q(25),19,20-epoxycytochalasin Q(26),cytochalasin D(27),deacetyl-19,20-epoxycytochalasin Q(28)和19,20-epoxycytochalasin C(29)。
从海洋真菌Penicillium sp.F07中分离到化合物10个,根据理化性质和波谱数据鉴定了5个化合物,分别为:7-methoxylphthalexin(30),phthalexin-4;-O-a-ghcopyranoside(31),2,3-dihydroxyphthalexin(32),mycophenolic acid(33)和phthalexin(34)。
从海洋真菌Cordyceps memorabilis F115中分离11个化合物,根据理化性质和波谱数据鉴定了4个化合物,分别为:cordymemorin A(35),cordymemorin B(36),cordymemorin C(37),steperoxide(38)和P-tyrosol(39)。
从上述鉴定的39个化合物中,其中化合物1、23和24为新的细胞松弛素化合物,化合物30-32为新的霉酚酸衍生物,化合物35-37为新的环七肽类化合物。
对分离得到的部分单体化合物进行了细胞毒活性测试。采用MTT法,对人乳腺癌细胞株MCF-7、入神经系统肿瘤细胞株SF-26和人大细胞肺癌细胞株NCI-H460进行抗肿瘤活性测试,细胞松弛素类新化合物deacetylcytochalasin Q对人神经系统肿瘤细胞株SF-268和人大细胞肺癌细胞株NCI-H460表现出微弱的细胞毒活性,IC50分别为44.3μM和96.4μM,而已知化合物cytochalasin D有最好活性,其IC50分别为18.6μM、51.4μM和14.4μM。
本文对5株海洋真菌进行培养方式的探索以及次级代谢产物的研究,同一菌株通过不同培养方式获得更多的次级代谢产物,一方面丰富了海洋天然产物的化合物结构,另一方面挖掘了海洋真菌次级代谢产物的生产潜力。通过活性筛选发现一些具有活性的化合物,为海洋微生物资源的有效利用提供了一定的科学依据。