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细交链格孢菌酮酸（Tenuazonic acid,TA）是链格孢霉毒素中毒性最强的一种,是链格孢霉,稻瘟病霉等在特定条件下产生的有毒代谢产物之一。TA具有急性毒性、亚急性毒性、潜在致癌性和协同毒性,是链格孢霉毒素中关注度最高、被研究最多的一种毒素。目前TA检测主要采用以色谱为主的仪器检测方法,缺乏快速检免疫检测产品。本研究旨在建立快速有效的TA检测方法和开发配套试剂盒,并利用杂交瘤细胞技术制备灵敏度高、性质稳定的抗TA单克隆抗体,为开发更多商品化的TA免疫检测产品奠定基础。本研究利用肟化法和活泼酯法合成人工抗原,经过动物免疫制备抗TA多克隆抗体。利用多克隆抗体建立间接竞争酶联免疫吸附法（Indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,icELISA）及将化学发光反应和免疫反应相结合的间接竞争化学发光免疫法（Indirect competition chemiluminescence enzyme immunoassay,icCLEIA）,通过对方法的重要影响因素研究,研制组装了配套试剂盒。在多克隆抗体制备技术的基础上,将能产生抗TA多克隆抗体的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP0/2）进行细胞融合制备杂交瘤细胞。经亚克隆培养筛选出5株特异、稳定分泌抗TA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选择其中性状最好的一株细胞通过体内诱生腹水的方法制备大量抗TA单克隆抗体,为批量生产性质稳定的免疫检测产品提供抗体保证。主要研究结果如下:（1）建立icELISA检测方法并开发ELISA试剂盒。研究icELISA的包被浓度、包被时间、封闭液种类、抗血清稀释度、竞争反应时间、酶标二抗稀释度、二抗反应时间和显色时间等条件,确定其最佳反应条件为:包被浓度2.5μg/mL、37℃包被1 h、5%脱脂奶粉封闭、抗血清稀释64 000倍、竞争反应30 min、二抗稀释6 000倍、二抗反应时间60 min、显色15 min。方法的标准曲线为y=-21.65x+53.68（R2=0.9941）,IC50为1.48 ng/m L,最低检出限（Limt of detection,LOD）为0.02 ng/mL,检测范围0.0635.95 ng/mL,回收率范围81.59%91.52%。ELISA试剂盒批内变异系数为2.48%,批间变异系数为9.49%;未完全密封时4℃至少保存60 d;该试剂盒与黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）、赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）、T-2毒素（T-2 toxin,T-2）、展青霉毒素（Patulin,PAT）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Desoxynivalenol,DON）、玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）和交链孢酚（Alternariol,AOH）的交叉反应率均小于1%,说明该试剂盒特异性好,与其他毒素不发生交叉反应。（2）建立icCLEIA检测方法并开发CLEIA试剂盒。研究icCLEIA的缓冲液pH值、包被浓度、封闭液种类、抗血清稀释度、竞争反应时间、酶标二抗稀释度和发光底物添加量等条件,确定icCLEIA的最佳工作条件为:缓冲液pH范围6.47.4,包被浓度2.0μg/mL、封闭液1%OVA、抗血清稀释80 000倍,竞争反应30 min、酶标二抗稀释度8 000倍、发光底物添加量为125μL/孔。方法的标准曲线为y=49.82-20.14x（R2=0.9966）,IC50为0.973 ng/mL,LOD为0.010 ng/mL,在相同试剂条件下特异性和方法灵敏度均高于icELISA,适合低浓度TA检测;检测范围0.03230.244 ng/mL,回收率81.53%96.09%。试剂盒的批内变异系数为4.08%,批间变异系数为8.91%;未密封的试剂盒在4℃下可至少保存90 d。试剂盒与AFB1、OTA、PAT、DON、ZEN和AOH的交叉反应率均小于1%,说明试剂盒特异性好,没有交叉反应。（3）小鼠骨髓瘤细胞与脾细胞融合后,经亚克隆培养筛选5株阳性细胞株。细胞株分别命名为TAO-4A1、TAO-4D5、TAO-4F4、TAO-7F11和TAO-7G11。将TAO-4F4细胞株扩大培养后通过体内腹水诱生制备抗TA单克隆抗体。腹水经蛋白A层析法纯化后得到单克隆抗体,浓度为0.40 mg/mL。纯化的单克隆抗体具有50 KDa和25 KDa的重链和轻链,没有杂蛋白。icELISA结果表明单克隆抗体的IC50为6.1 ng/mL。抗TA单克隆抗体IC50与提供脾细胞的小鼠多克隆抗体(IC50为420 ng/m L)相比降低约69倍。