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【目的】慢性粒细胞性白血病,简称慢粒(chronic myelocytic leukemia,CML)是一种起源于骨髓多能造血干细胞的获得性恶性增殖性疾病。90%以上的病例均具有CML的标记染色体----费城染色体,其分子生物学基础则是BCR-ABL基因重排。BCR-ABL可引起NF-κB的活化,引起肿瘤生长、转移、耐药等肿瘤生物学特性的改变。CARMA1高表达于慢粒,可能在BCR-ABL诱发的NF-κB活化中起重要作用。EGR-1为一抑癌基因,其启动子序列中含有NF-κB的连接位点,可共同调控肿瘤的侵袭转移。本研究通过分析慢病毒介导的CARMA1的稳定沉默引发的K562细胞侵袭转移能力及相关信号通路的改变,探讨可能机制。【方法】应用慢病毒质粒系统和包装细胞293T,利用磷酸钙共沉淀转染法包装合成能使CARMA1基因表达稳定沉默的慢病毒颗粒并用其感染K562细胞,puromycin选择性筛选,构建CARMA1基因稳定沉默的细胞株模型。利用RT-PCR检测CARMA1 mRNA表达,Western Blot检测CARMA1蛋白表达,台盼蓝拒染法检测细胞生长情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成情况。体外迁移和侵袭实验(Transwell小室共培养系统和Matrigel胶)等分析CARMA1抑制对肿瘤侵袭转移能力的影响及其引起的相关信号通路分子的改变,深入探讨可能机制。【结果】K562经携带shRNA的慢病毒颗粒感染,puromycin筛选后成功构建六株细胞株:其中一株为阴性对照(K562/sh-eGFP),另五株为实验组(K562/shCARMA 1-90、K562/shCARMA 1-91、K562/shCARMA 1-92、K562/shCARMA1-93、K562/shCARMA 1-94)。经RT-PCR、Western Blot鉴定后,发现K562/shCARMA 1-93对CARMA1的抑制效果最好。利用该细胞模型进行后续研究,得出以下结果:(1)台盼蓝拒染法表明,K562/shCARMA 1-93的生长受到明显抑制(P<0.01)。培养一周后,相比空白对照K562和阴性对照K562/sh-eGFP,生长抑制率分别为29.3%和28.6%;在克隆形成实验中也发现K562/shCARMA 1-93克隆形成能力下降(P<0.01)。相比空白对照K562和阴性对照K562/sh-eGFP,克隆抑制率分别达37.6%和34.1%。体外迁移和侵袭转移实验证实,K562和K562/sh-eGFP穿膜细胞数没有明显差异(P>0.05)。K562/shCARMA1-93穿膜细胞数与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.01)。说明抑制CARMA1能显著降低K562细胞侵袭和迁移能力。(2)应用WB和RT-PCR技术检测信号通路分子的改变,结果发现CARMA1抑制后,BCL10、NF-κB及EGR1的表达随之下降。【结论】应用慢病毒介导的RNAi技术成功构建CARMA1稳定沉默的细胞模型K562/shCARMA1-93。利用该细胞株发现CARMA1的抑制会导致BCL10、NF-κB和EGR1受到不同程度抑制,影响K562细胞的生长及克隆形成,降低其迁移和侵袭能力。