血根碱通过AMPK调节成骨细胞的增殖和凋亡信号通路研究

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目的:研究血根碱调节成骨细胞增殖与凋亡的作用机制。方法:1、原代分离新生大鼠头颅骨成骨细胞,ALP染色鉴定成骨细胞分离成功。2、5个不同浓度的血根碱处理原代分离的大鼠成骨细胞和小鼠MC3T3-E1细胞,CCK-8试验、ALP活性实验确定血根碱对成骨细胞增殖促进作用,Western blot检测AMPKa1和P-AMPKa1的表达;3、成骨细胞分组:空白组、空载体组、AMPKa1干扰组、血根碱高剂量+空载组、AMPKa1干扰组+血根碱高剂量组;CCK8检测细胞增殖、ALP活性检测、流式检测细胞凋亡情况;Western blot检测AMPKa1、P-AMPKa1、BMP2、OSX、OPG、Bcl2、Bax、Smad1、P-smad1基因表达。结果:1、倒置相差显微镜观察分离的原代成骨细胞呈梭形、不规则的多边形,并且有数量不等的突起伸出,符合成骨细胞典型特征,碱性磷酸酶染色结果显示,绝大部分细胞胞浆内形成了紫黑色的颗粒状沉淀,呈阳性反应,符合成骨细胞的生物学特性。2血根碱可增加AMPKa1的表达量、促进成骨细胞的增殖、刺激碱性磷酸酶的活性,并表现出一定的浓度依赖性。3、血根碱可逆转AMPKa1干扰组对成骨细胞增殖的促进和加速凋亡的作用;P-AMPKa1表达增加可调控BMP2、OSX、OPG、Bcl2、P-smad1基因表达上调及Bax基因表达下调。结论:1、血根碱通过增加AMPKa1的活化,进而促进成骨细胞的增殖、刺激碱性磷酸酶的活性,并表现出浓度依赖性。2、血根碱通过AMPK途径调节成骨细胞的增殖与凋亡,是由P-AMPKa1控制BMP2、OSX、OPG、Bcl2、P-smad1基因表达上调及Bax基因表达下调实现的。
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