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本研究将含有人乳铁蛋白(HLF)基因2366bp cDNA序列完整序列和800bp的奶山羊β-乳球蛋白基因5’端调控序列的乳腺特异表达重组载体pLNCXHLF按常规方法提取、纯化、PCR、酶切鉴定后，用于细胞表达和精子介导转基因动物的研究。 利用脂质体包裹重组质粒pLNCXHLF，导入到小鼠乳腺癌细胞株MA-782中，G418及PCR筛选获得阳性单克隆细胞。转染细胞利用海藻酸钠固定化包埋培养，同时加入激素诱导。诱导后，培养液上清通过Western-blotting分析证明，转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白，分子量为34KD；ELISA检测重组蛋白最高表达量为65mg／L培养基／10~5细胞；抗菌实验表明，所获得的重组人乳铁蛋白具有抑制大肠杆菌生长的作用，而且比人乳铁蛋白标准品作用更强。 采用直接注射的方法，将脂质体包裹的含人乳铁蛋白基因的重组质粒pLNCXHLF注入兔睾丸组织和羊输精管中，进行转基因动物制备研究。所产F1代仔兔均为活体，经PCR和Southern检测，转基因阳性率相对较高(35％)，而且雄体的这种能力保持的时间也很长(注射后七个月，仍可通过PCR、Southern的方法从睾丸、附睾及输精管中的精子里检测出外源基因)，受精后可产生转基因兔。F1代羔羊经F1／R1系统PCR检测阳性率为33.3％(4／12)，其中活体PCR阳性母羊一只。用F2／R2系统PCR检测F1代仔羊，阳性率为25％(3／12)，3只均为为流产羔羊，组织解剖后提取舌，肺，肝脏，肌肉，皮肤，脑，生殖腺，脾脏，小肠，心脏，肾脏共11种组织的总DNA进行PCR检测，发现：F1／R1系统，3只羔羊肾脏中都没有外源DNA存在，而其他组织有不同程度的存在。F2／R2 PCR系统检测阳性信号较F1／R1 PCR系统少。而且各种组织的外源DNA存在的拷贝数不等，造成阳性信号的强弱程度不同。结果表明：(1)脂质体包裹外源基因转染精子的方法，可将外源基因导入受精卵中，能够获得转基因动物，并得到了较高的转基因阳性率；(2)精子携带的外源DNA的整合过程是随机的，在受精过程和胚胎早期分化过程中可能发生了片段丢失、不完全整合或游离于基因组存在而产生嵌合体。本文的研究结果证明了该方法是一种简捷有效的新途径，为进一步深入探讨精子介导的转基因动物制备可行性奠定了基础，为利用精子载体法制备转基因哺乳动物研究提供了有价值的参考。