论文部分内容阅读
静脉输注中药注射液引发的不良事件屡有发生,中药注射液中的成分复杂,不稳定性因素较多,需建立同时测定多种有效成分的方法对其进行质量控制;随着各三甲医院静脉用药调配中心集中配液工作的有效开展,中药注射液处于举足轻重的地位,为探讨其从配置到输注过程中质量的变化,需研究室内光照对中药注射液成品输液稳定性的影响以指导临床合理用药、减少不良事件的发生。苦黄注射液是由苦参、大黄、茵陈蒿、柴胡和大青叶经加工制成的纯中药复方静脉注射液,具有清热利湿、疏肝退黄的功效。谷红注射液是由乙酰谷酰胺与红花提取液组成的中西药复方制剂,二者联合能协同保护脑缺血损害、抵抗慢性缺氧、改善认知功能。本研究建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)分别同时测定苦黄注射液中4个组分的7种有效成分的含量、谷红注射液中2个组分的7种有效成分的含量,分别建立苦黄注射液3种溶媒配伍、谷红注射液4种溶媒配伍的成品输液的稳定性研究方法。本研究能快速、高效、精确、全面对苦黄注射液与谷红注射液进行质量控制,能科学、客观、准确分析室内光照对成品输液稳定性影响的关键指标,为临床合理、安全、有效用药提供有意义的参考依据。第一部分UPLC-MS/MS法同时测定苦黄注射液中7种有效成分目的:建立UPLC-MS/MS法同时测定苦黄注射液中苦参碱、槐果碱、大黄素、大黄酸、绿原酸、柴胡皂苷a、芦荟大黄素含量的方法。方法:采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,5μm),柱温20℃;以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为0.5m L/min,进样量5μL;采用电喷雾离子源进行正负离子模式监测,多反应监测模式(MRM)用于定量分析,源喷射电压为5500 V、-4500 V,离子源温度为600℃。苦参碱、槐果碱、大黄素、大黄酸、绿原酸、柴胡皂苷a、芦荟大黄素的检测离子对分别为249.2/148.1,247.2/136.1,269.0/225.0,283.1/239.0,353.2/190.9,825.5/779.4,271.1/225.0。结果:在10 min内苦黄注射液中7种有效成分完全分离;峰面积与浓度呈良好的线性关系(r≥0.9973);检测限和定量限分别小于1.528、3.055 ng/m L;日内精密度RSD(%)分别为1.04~2.98(n=6),日间精密度RSD(%)分别为1.33~2.91(n=6),表明该方法精密度良好;12 h内稳定性良好;试验重复性良好;加样回收率为95.20%~104.0%。结论:该方法简便、快速、高效,结果准确、可靠,适用于同时测定苦黄注射液中苦参碱、槐果碱、大黄素、大黄酸、绿原酸、柴胡皂苷a、芦荟大黄素7种有效成分,为该制剂建立更全面的质量控制方法提供依据。第二部分UPLC-MS/MS法同时测定谷红注射液中7种有效成分目的:建立UPLC-MS/MS法同时测定谷红注射液中乙酰谷酰胺、羟基红花黄色素A、芦丁、紫丁香苷、山奈素、山奈酚、槲皮素含量的方法。方法:采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,5μm),柱温20℃;以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为0.5m L/min,进样量5μL;采用电喷雾离子源进行正负离子模式监测,多反应监测模式(MRM)用于定量分析,源喷射电压为5500 V、-4500 V,离子源温度为600℃。乙酰谷酰胺、羟基红花黄色素A、山奈素、山奈酚、槲皮素、芦丁、紫丁香苷的检测离子对分别为186.9/144.8、611.3/491.2、299.1/283.9、285.0/117.0、301.1/150.9、609.2/300.1、609.2/300.1。结果:在7 min内谷红注射液中7种有效成分完全分离;峰面积与浓度呈良好的线性关系(r≥0.9988);检测限和定量限分别小于0.18、0.6ng/m L;日内精密度RSD(%)分别为1.45~3.81(n=6),日间精密度RSD(%)分别为0.81~3.67(n=6);12 h内稳定性良好;试验重复性良好;加样回收率为95.3%~104.1%。结论:该方法简便快速,且灵敏度高、专属性强,适用于同时测定谷红注射液中乙酰谷酰胺、羟基红花黄色素A、芦丁、紫丁香苷、山奈素、山奈酚、槲皮素7种有效成分,为全面建立该制剂的质量控制方法提供可靠依据。第三部分苦黄注射液成品输液的稳定性研究目的:考察苦黄注射液最大剂量、最小剂量与5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、果糖注射液配伍后的成品输液于室温下放置48 h的稳定性及室内光照对成品输液的影响。方法:苦黄注射液按最大剂量、最小剂量与3种溶媒配伍后,分为室内光照组与遮光组,考察各成品输液于室温下放置48 h内的溶液外观、不溶性微粒、pH、苦参碱和槐果碱的含量变化,其中外观、不溶性微粒按2015版《中国药典》第四部通则项下特性检查法进行检测,苦参碱和槐果碱含量采用高效液相色谱法(HPLC-UV)测定。结果:结果各成品输液在48 h均澄清,无明显浑浊、沉淀产生,颜色无明显变化,为深黄色澄清溶液;低浓度室内光照组的10%葡萄糖注射液的成品输液pH在6 h显著升高,遮光组较室内光照组稳定,果糖注射液的成品输液呈弱酸性;高浓度组中果糖注射液的成品输液24 h后的微粒值不符合规定,其余组的微粒值48 h内符合规定;各成品输液中的苦参碱含量基本保持不变,槐果碱含量逐渐降低,遮光组较室内光照组稳定。结论:果糖注射液不适合作为苦黄注射液的溶媒,成品输液由配制到输注遮光较稳定,且应尽早使用以减少有效成分的降解。第四部分谷红注射液成品输液的稳定性研究目的:建立HPLC-UV法同时测定谷红注射液中4种有效成分(乙酰谷酰胺、羟基红花黄色素A、紫丁香苷、腺苷),考察常规剂量谷红注射液与5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%NaCl注射液、果糖注射液配伍后的成品输液室温下放置48 h的稳定性及室内光照对成品输液的影响;考察重症监护室(ICU)超剂量用药的合理性。方法:采用HPLC-UV法同时测定4种有效成分;常规剂量谷红注射液与4种溶媒配伍后,分为室内光照组与遮光组,考察各成品输液于室温下放置48 h内的溶液外观、不溶性微粒、pH、4种有效成分含量变化;考察超剂量谷红注射液与2种常用溶媒配伍后的成品输液在室内光照下于室温(约25℃)放置24 h内以上4个指标变化情况。结果:各常规剂量成品输液在48 h均澄清,无明显浑浊、沉淀产生,颜色无明显变化;与0.9%NaCl注射液配伍后的成品输液在0 h不溶性微粒略高于规定值,其余符合规定(n=3);果糖注射液的成品输液中有效成分逐渐下降;遮光组较室内光照组稳定。ICU超剂量成品输液不溶性微粒不符合规定,其中有效成分含量逐渐下降。结论:常规剂量谷红注射液与0.9%NaCl注射液配伍后1 h后使用,与果糖注射液影响药品质量故不建议此配伍,成品输液储存与输注过程尽量做到避光;ICU谷红注射液超剂量用药时不溶性微粒超标,且有效成分的含量明显呈下降趋势,故不建议该用药剂量。