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子宫颈癌(cervical carcinoma)为女性最常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率逐年增高且趋于年轻化，因此对宫颈癌的发生发展及转移机制的研究十分重要。本实验通过对宫颈鳞癌VEGF及其受体Flk－1的阳性表达、微血管密度及CT灌注参数等指标的检测，并与宫颈癌临床分期、分化程度及浸润深度等进行相关性分析，为宫颈癌的诊治及预后提供理论依据。 第一部分宫颈癌中微血管密度、VEGF及其受体Flk－1表达的意义 目的：采用MaxVision免疫组化方法检测宫颈癌中微血管密度(microvessel density，MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk－1在宫颈癌中的阳性表达，探讨MVD及VEGF/Flk－1与宫颈癌增殖、发展的关系，为临床治疗宫颈癌及评价预后提供理论依据。 方法：选取40例宫颈鳞状细胞癌(Ⅰb2～Ⅱb期)患者肿瘤标本组织为研究对象，以正常宫颈组织作为对照(26例)。采用MaxVision法对石蜡切片进行免疫组化染色，一抗为鼠抗人CD34单克隆抗体、兔抗人VEGF、Flk－1多克隆抗体。显微镜下对肿瘤的微血管密度进行计数，采用Orre等报道的方法，将邻近血管、肿瘤细胞及与其它结缔组织分开的、染成棕色的单个血管内皮细胞或细胞簇定义为微血管，大于8个内皮细胞形成的管腔或未染色的管腔不记数。在400倍镜下记数获取MVD(微血管数/mm2)，取最高值为微血管数。对肿瘤及正常宫颈组织的VEGF/Flk－1阳性表达率进行检测，按Volm等的判断标准分阴性、弱阳性、中阳性及强阳性进行评价。 统计采用SPSS15.0软件进行，计数资料采用x2检验，两组计量资料采用独立样本t检验，多组计量资料采用单因素方差分析。P<0.05为有统计学意义。 结果： 1宫颈鳞癌组织的微血管密度(MVD)计数明显高于正常宫颈组织，且二者之间有显著性差异(P<0.05)。 2宫颈鳞癌中的VEGF及FLK－1阳性表达率明显高于正常宫颈组织，二者有显著统计学差异(P<0.01)。VEGF与受体FLK－1蛋白表达强度无明显统计学差异(P>0.05)。 小结： 1在宫颈鳞癌中MVD计数值明显高于正常宫颈组织；宫颈鳞癌临床分期高及非角化型鳞癌组中MVD值明显高于临床分期低及角化型病例组，证实MVD与宫颈鳞癌的增殖、发展密切相关。 2 VEGF及其受体Flk－1在宫颈鳞癌肿瘤细胞及肿瘤内皮细胞中呈明显高表达，显著高于二者在正常宫颈组织中的阳性表达率，证实VEGF及受体Flk－1与宫颈鳞癌的发展密切相关。 第二部分宫颈癌CT灌注参数与微血管密度(MVD)的相关研究 目的：利用64螺旋CT对宫颈癌(cervical carcinoma)组织进行灌注扫描(CTPI)，获取TDC图及灌注参数BF/BV/MTT/PS，并与宫颈癌组织微血管密度(MVD)计数进行对比分析，探讨一种能比较准确地在活体上反映肿瘤血管生成状况的影像学方法。 方法：利用64排螺旋CT对40例宫颈鳞癌(Ⅰb2～Ⅱb期)患者进行灌注扫描检查。应用灌注软件CT Perfusion3获取时间－密度曲线(time-densitycurves，TDC)及灌注图像，在灌注图中相关层面内测定兴趣区(ROI)组织的灌注参数：血流量(blood flow，BF)、血容量(blood volume，BV)、平均通过时间(mean－transit time，MTT)及表面通透性(permeabilitysurface，PS)。 选取与灌注部位相对应的癌肿术后标本组织，采用MaxVision法对石蜡切片进行免疫组化染色，一抗为鼠抗人CD34单克隆抗体。显微镜下计数阳性MVD数目。 统计采用SPSS15.0软件进行，计数资料采用x2检验，两组计量资料采用独立样本t检验，多组计量资料采用单因素方差分析，相关性分析采用spearman等级相关分析，P<0.05为有统计学意义。 结果： 1宫颈鳞癌的时间-密度曲线(TDC)可分为三种类型：Ⅰ型：速升-下降-平台型；Ⅱ型：速升-平台型；Ⅲ型：速升-缓降型。 2宫颈鳞癌各项灌注参数数值均表现为：宫颈癌组>正常宫颈组，且组间差异有显著统计学意义(P<0.05)。 3宫颈癌在临床分期高、组织学分级低、浸润深度大及有淋巴结转移病例中显示BF值明显增高；在组织学分级低及有淋巴结转移组病例BV值明显增高；MTT值在浸润深度大的患者中明显增高；PS值在有淋巴结转移组中明显高于无淋巴结转移组。以上所述各组与对应分组间均有显著性差异(P<0.05)。 4 CT灌注参数中：BF/BV/MTT值与MVD正相关(r值分别为0.867，0.912，0.727；P<0.01)，PS与MVD间无明显相关(r值为-0.168，P>0.05)。 小结： 1宫颈鳞癌TDC曲线持续高位，灌注参数BV/BF/MTT/PS值明显高于正常宫颈组织，对深入理解宫颈鳞癌微血管的特征、癌肿的影像学诊断及鉴别诊断有重要的参考价值。 2宫颈鳞癌CT灌注参数BV/BF/PS值与MVD之间呈正性相关，MTT与MVD无关。CT灌注成像能比较准确地反映活体上肿瘤的血管生成情况，间接反映肿瘤的分化程度、.浸润深度和临床分期，对宫颈鳞癌的术前抗肿瘤血管生成治疗及对预后的评估具有临床实用价值。 第三部分放疗前后宫颈癌微血管密度、VEGF/Flk-1蛋白表达及CT灌注的变化 目的：对宫颈癌放疗前后的病理学参数(MVD/VEGF/Flk-1)及CT灌注参数进行检测，观察并分析数值的变化，探讨辅助性术前放疗对宫颈癌根治术的临床应用价值；分析宫颈癌CT灌注参数与VEGF及其受体Flk-1之间的相关性，探讨CTPI对宫颈癌的增殖、发展及预后评估中的应用价值。 方法：利用64排螺旋CT对15例宫颈鳞癌(Ⅰb2～Ⅱb期)患者于放疗前及术前1周进行两次灌注扫描检查，CT灌注扫描造影剂共50ml，注射速度为5ml/s。所得数据采用灌注软件CT perfusion3，获取BF、BV、MTT及PS。 选取放疗前宫颈癌组织(活检)、术后肿瘤标本及正常宫颈组织为兴趣区(ROI)，采用MaxVision法对石蜡切片进行免疫组织化学染色，一抗为鼠抗人CD34单克隆抗体、兔抗人VEGF、Flk-1多克隆抗体。显微镜下计数阳性MVD数目以及VEGF及其受体Flk-1阳性表达百分率。将放疗前后及对照组的检测数据进行对比分析。 统计采用SPSS15.0软件进行，计数资料采用x2检验，两组计量资料采用配对样本t检验，多组计量资料采用单因素方差分析。P<0.05为有统计学意义。 结果： 1 MVD在放疗前癌肿、术后肿瘤标本组织中的数值分别为：46.92±10.27、24.20±7.94，放疗前>放疗后，放疗前与放疗后组间相比差异有统计学意义(P<0.01) 2 VEGF及Flk-1在宫颈癌(活检)、术后肿瘤标本组织(放疗后)、正常宫颈组织中数据显示：放疗前组>放疗后组>正常宫颈组织，且组间有显著性差异(x2分别为33.6和24.9，P<0.05)。 3放疗前肿瘤组灌注参数(BF、BV、MTT、PS)数值明显大于放疗后，且两组间差异有统计学意义(P=0.00<0.05)。 小结： 1宫颈癌术后标本组织(放疗后)中VEGF/Flk-1的阳性表达率较放疗前癌肿组织明显降低、MVD计数明显减小，证实术前放疗作为宫颈癌根治手术的辅助手段，能有效降低肿瘤的分期，提高根治术的成功率。 2宫颈癌术后肿瘤标本组织(放疗后)BF及BV较放疗前明显降低，MTT较放疗前明显增高，差异显著。PS较放疗前无显著性差异。证实CT灌注可准确反映宫颈癌术前放疗辅助手段的疗效，具有重要的临床应用价值。