苦荞属于荞麦栽培种中的一种,由于其特殊的营养价值和药用价值逐渐引起人们长期的关注,苦荞含有丰富的黄酮类化合物、酚类化合物、活性蛋白和其他物质,经常食用可预防和治疗心脑血管疾病,降低“三高”、延缓衰老等,被称为21世纪人类自己能种植的“灵丹妙药”,“长生不老的保健食品”等。但是过敏症也不断报道,食用荞麦后可能会引起一系列的过敏反应,如荨麻疹,哮喘,严重时甚至休克,死亡,这是由于苦荞中的某些过敏成分经食用后所引起的。本研究小组先前已经分离纯化得到分子量为56kDa、34kDa和24kDa的过敏原,用免疫印迹法检测到它们能够同荞麦过敏患者血清中的IgE特异性结合,因此研究低过敏性的苦荞食品是非常必要的。通常,降低过敏蛋白的免疫活性的方法有加热,调节pH,金属离子,物理辐射等等。本实验主要从金属离子与苦荞过敏蛋白TBt的相互作用进行研究。按照前期的方法,本研究首先通过分离、纯化得到纯度95%以上的过敏蛋白TBt。之后配置不同金属离子溶液(Cu2+、Mg2+、Ca2+、Ba2+、Ni2+、AL3+),并与TBt以不同比例进行混合,待相互作用一段时间后进行荧光光谱分析。结果表明,在所选的金属离子中,Cu2+对TBt的结构和活性有较明显的影响。进一步研究结果显示,TBt与Cu2+的结合位点约为1：1,二者主要以静电作用力结合。圆二色光谱探讨了Cu2+对TBt二级结构的影响,发现Cu2+与TBt相互作用后其二级结构未发生明显变化。但Native-PAGE分析和ELISA检测均显示,Cu2+与TBt作用后,可使典型Cupin家族的过敏原TBt由三聚体进一步聚合形成部分六聚体,同时IgG结合能力有所降低。由此得出Cu2+的加入可以使得TBt形成六聚体,部分抗原决定簇被遮, 挡,导致过敏性有所降低。本实验结论为深入研究TBt在植物体内的存在状态以及荞麦中特征微量元素Cu2+等对储藏蛋白的调控提供了理论参考和科学依据。为了检测几种食品中可能存在有微量的苦荞过敏蛋白,本实验采用纯化的TBt免疫动物制备兔和鼠多克隆抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法。实验结果显示,双抗体夹心ELISA试剂盒能够检测到浓度为0.16 μg/mL的TBt,其灵敏性和特异性均比间接性ELISA的检测结果高。