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从2011年的震惊整个台湾的塑化剂风波,到2012年酒鬼酒、红花郎酒等多种酒类中被检塑化剂严重超标的事件,再到2013年在聚乙烯保鲜膜中又发现禁用的塑化剂,塑化剂这一名词受到人们越来越多的关注,也充分说明在如今的食品、生活用品等行业中存在着巨大的安全隐患。邻苯二甲酸(2-乙基)己酯(DEHP)和邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP)是两种应用非常广泛的邻苯二甲酸酯类物质(即塑化剂),它们的毒性很强,如果长期暴露在这两种物质中,将会引起严重的健康问题。因此建立简单快速地检测邻苯二甲酸酯类的方法显得尤为重要。本文中提出了两种高灵敏的酶联免疫分析方法,采用抗原包被模式分别检测婴儿用品中的DEHP和食品中的BBP。利用重氮化法将4-氨基邻苯二甲酸丁基苄酯(4-BBAP)或者4-氨基邻苯二甲酸(2-乙基)己酯(4-DEHAP)与BSA结合制得免疫原,从而制得相应的多克隆抗体。利用同样的方法将4-BBAP或者4-DEHAP与OVA结合制得包被抗原。在最佳实验条件下,直接竞争酶联免疫法(dc-ELISA)的检测DEHP区间在10-3~103ng/mL,相关系数0.998,最低检测限是0.0042ng/ml,与结构类似物的交叉反应率均小于1%,用此方法检测婴儿用品中的DEHP,加标回收率80.8%~119.2%,满足实验要求。生物素-链霉亲和素放大系统酶联免疫分析法(BA-ELISA)的检测BBP区间在10-4~102ng/mL,相关系数0.997,最低检测限是0.0007ng/ml,与结构类似物的交叉反应率均小于0.01%。此方法成功用于检测运动饮料,绿茶,奶茶,果汁,碳酸饮料,矿泉水中的bbp,加标回收率81.9%~119.1%,满足实验要求。结果表明dc-elisa和ba-elisa是简单,灵敏,特异性强的两种方法,适合检测检测婴儿用品中的dehp和食品中的bbp的含量。本论文的工作内容和创新点表现在以下几个方面:1.合成了4-氨基邻苯二甲酸丁基苄酯半抗原用4-硝基邻苯二甲酸酐和无水正丁醇作为反应原料,在120°c下发生水解酯化反应,之后调节ph至8~8.5,在聚乙二醇600催化下制得4-硝基邻苯二甲酸丁基苄酯(4-bbnp);纯化后的4-硝基邻苯二甲酸丁基苄酯溶于有机溶剂苯中,加入锌粉,发生还原反应制得4-氨基邻苯二甲酸丁基苄酯(4-bbap)。对纯化后的产物进行核磁表征,并计算产率为84%。2.制备了bbp多克隆抗体采用重氮化法,分别将半抗原4-氨基邻苯二甲酸丁基苄酯、4-氨基邻苯二甲酸(2-乙基)己酯与载体蛋白(bsa或ova)结合制备出相应的人工全抗原,选用4-bbap、4-dehap与bsa的结合物作为免疫抗原,4-bbap、4-dehap与ova的结合物作为包被抗原。通过紫外光谱扫描方法鉴定了人工抗原。将合成的免疫抗原免疫雄性新西兰大白兔,三个月后采集血样,测定血清效价,得到效价为1:64000的抗bbp多克隆抗体。3.建立了直接竞争酶联免疫分析方法测定婴儿用品中的dehp本实验以4-dehap与ova的结合物为包被抗原,hrp标记抗dehp抗体,建立了直接竞争酶联免疫分析方法测定婴儿用品中的dehp的实验体系。优化了dc-elisa的最佳实验条件,在最佳实验条件下得到线性方程y=0.6470-0.034lgc,其中y代表吸光值,c是dehp的浓度,该方法的线性范围为10-3~103ng/ml,检测限为0.0042ng/ml。该方法简单,快速,高灵敏度,高特异性地对婴儿用品中的dehp进行了检测。4.生物素-链霉亲和素放大系统酶联免疫分析法测定食品中的bbp本实验以4-bbap与ova的结合物为包被抗原,生物素化羊抗兔igg和hrp标记的链霉亲和素作为检测探针,利用生物素与链霉亲和素之间超强的亲和力来实现信号放大的目的,从而对食品中的bbp进行检测。在优化的最佳实验条件下,得到线性方程y=0.803-0.068lgc,其中y代表吸光值,c是bbp的浓度,线性范围为10-4~102ng/ml,检测限为0.0007ng/ml。在此方法的基础上,检测了十五种食品样并进行了不同浓度的加标回收,回收率在81.9~119.1%之间,抗体与几种结构类似物的交叉反应率很低,不影响实验检测的结果。与传统的色谱法相比,ba-elisa操作更加简便,成本较低,灵敏度高、特异性强。