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目的:本课题组前期通过慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的miRNA转录组分析发现,miRNA-186-5p在COPD中表达存在差异,可能在COPD的发生发展中起重要作用,但其具体作用机制不明。进一步的生物信息学分析发现,miR-186-5p可与lncRNA RP11-20G6.3及HIF-1α靶向结合。因此,本研究拟从细胞水平探究miRNA-186-5p在COPD中的生物学功能,并揭示miRNA-186-5p与lncRNA RP11-20G6.3及HIF-1α的靶向调控作用,初步在细胞水平探究lncRNA RP11-20G6.3对COPD发生的影响,同时在COPD患者血清中验证lncRNA RP11-20G6.3表达水平,为揭示其分子机制提供理论依据。方法:(1)采用脂多糖(LPS)诱导炎症构建人支气管上皮(BEAS-2B)细胞模型。(2)分别合成miR-186-5p、lncRNA RP11-20G6.3低表达序列并转染细胞,用CCK-8法检测细胞增殖活性、流式检测细胞凋亡及细胞周期;RT-qPCR检测TNF-α、HIF-1α、IL-6的mRNA表达,Western blot检测TLR-4/NF-κB信号通路p65、p-p65蛋白表达水平。(3)双荧光素酶报告实验验证miRNA-186-5p与lncRNA RP11-20G6.3及HIF-1α的靶向调控作用。(4)观察COPD患者及健康对照者外周血lncRNA RP11-20G6.3的表达变化。结果:(1)通过LPS诱导BEAS-2B细胞模拟COPD炎症模型,通过RT-qPCR和Western bolt检测显示HIF-1αmRNA及蛋白水平表达增加,ELISA检测细胞上清中炎症因子显示IL-6、TNF-α的表达增加,证实细胞炎症模型构建成功,可用于后续实验。(2)低表达miR-186-5p可明显降低BEAS-2B的增殖能力,抑制miR-186-5p表达能促进BEAS-2B的凋亡,与细胞周期无显著关系;低表达lncRNA RP11-20G6.3能降低BEAS-2B细胞的增殖。(3)miR-186-5p低表达可以促进NF-κB炎症通路相关基因HIF-1α、TNF-α及IL-6基因表达。miR-186-5p可能通过NF-κB等影响COPD支气管上皮细胞的增生。(4)结合生物信息学分析以及荧光素酶报告实验验证发现miR-186-5p可与lncRNA RP11-20G6.3及HIF-1α靶向结合。(5)lncRNA RP11-20G6.3在COPD患者血清中较对照组表达明显上调。结论:(1)低表达miR-186-5p可明显降低支气管上皮细胞的增殖能力、促进其凋亡,低表达lncRNA RP11-20G6.3可降低其细胞的增殖,二者均在COPD中起重要作用。(2)miR-186-5p低表达可促进NF-κB炎症通路HIF-1α、TNF-α及IL-6的表达。(3)lncRNA RP11-20G6.3与miR-186-5p靶向结合、miR-186-5p与HIF-1α靶向结合,故推测lncRNA RP11-20G6.3可能通过与miR-186-5p结合调控HIF-1α参与NF-κB炎症相关信号通路,影响COPD支气管上皮细胞增殖及凋亡进程,从而参与COPD的发生机制。(4)lncRNA RP11-20G6.3在COPD患者外周血mRNA表达水平增高。