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大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、链球菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪葡萄球菌是猪场中主要的致病细菌，致病性与其毒力基因密切相关。本研究分别以每种细菌特异性毒力基因的高度保守区设计引物，建立监测猪场主要病原菌污染的多重PCR方法。 选择参考毒株大肠杆菌的LTa、STa、STb基因，链球菌2型的CPS2J基因，沙门氏菌的spvR基因，多杀性巴氏杆菌的kmt基因，胸膜肺炎放线杆菌的ApxIVA基因，分离鉴定的猪葡萄球菌nuc基因为目的基因设计引物。对每一对引物的浓度、退火温度进行优化。以大肠杆菌三个基因引物浓度分别为0.2μmol/L、0.4μmol/L、0.4μmol/L，链球菌2型引物为0.1μmol/L，猪葡萄球菌引物为0.2μmol/L，退火温度为49.4℃，建立了五重PCR方法，重复性好，最低检出量依次为：10-5 ng/μL、10-3ng/μL、10-1 ng/μL、10-3ng/μL、10-3ng/μL。以沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌的引物浓度分别为0.4μmol/L、0.2μmol/L、0.8μmol/L，退火温度为50.6℃，建立了三重PCR方法，重复性好，最低检出量依次为：10-3ng/μL、10-6ng/μL、10-2ng/μL。用建立的两种多重PCR方法分别对大肠杆菌参考毒株CVCC196、CVCC209、CVCC1519、CVCC1495，沙门氏菌参考菌株CVCC503、CVCC541，多杀性巴氏杆菌参考菌株CVCC1746，副猪嗜血杆菌参考菌株CVCC3728，链球菌2型参考菌株CVCC606，胸膜肺炎放线杆菌参考菌株CVCC268和分离毒株猪葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、链球菌各一株进行检测，结果表明两种多重PCR方法均具有良好的特异性。 人工模拟污染环境中细菌监测，选用大肠杆菌，采用压缩式雾化器进行雾化，细菌浓度108 CFU/m3。用气体采样泵收集空气，流量6L/min，收集液为20 mL pH7.4 PBS缓冲液，收集时间30min。超滤法浓缩细菌，细菌基因组DNA提取试剂盒提取DNA。应用构建的多重 PCR方法对其样品进行监测，结果显示大肠杆菌的最低检出量为6CFU/mL，表明建立的多重PCR方法可用于空气样品的监测。 应用建立的两种多重PCR方法对采自延津、济源、驻马店、三门峡4个猪场环境中的44份空气样品及济源某猪场12份粪便样品进行监测，空气样品中济源检出LTa、STa阳性各6份，各占13.6％；spvR阳性4份，占0.90％；驻马店检出CPS2J阳性10份，占22.7％；三门峡检出kmt阳性5份，占11.4％；济源某猪场12份粪便样品中， LTa、STa、spvR阳性各2份，各占16.7％。与单项PCR检测结果符合率达100％。 本研究建立了针对产肠毒素大肠杆菌、链球菌、猪葡萄球菌的五重 PCR监测方法和针对具毒性质粒沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌的三重 PCR监测方法，为及时掌握猪场清洁状况，建立有效的预警机制奠定了基础，对有效预防猪病的发生具有重要意义。