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本研究以全明星草莓(All star)为试材,建立草莓叶片高频再生体系,比较了不同因素对草莓叶片再生能力的影响。利用农杆菌LBA4404(pTSB)介导转化,获得了草莓转果聚糖果糖基转移酶(fructan fructosyl transferase)基因植株,并对影响外植体转化的因素进行了探讨。转化植株在Km90mg/L生根培养基中生根良好,PCR结果呈阳性,初步证明目的基因已经整合到草莓基因组中。抗冻试验、叶片电导率测定、多糖含量测定的实验结果证实果聚糖果糖基转移酶在草莓转化植株中已实现表达。具体工作如下: (1)草莓组织培养和高频再生体系的建立。选用草莓叶片和茎段进行组织培养、诱导再生,得到了以叶片为外植体的最适分化培养基为:TDZ1.0mg/L+NAA0.05mg/L+IAA0.2mg/L+GA0.25mg/L,分化率可达81.82%;生根培养基为MS0。 (2)在建立了草莓高频转化受体系统的基础上,利用农杆菌LBA4404(pTSB)进行转化研究。从工程菌的活化状态、侵染时间等方面阐述了草莓基因转化中的影响因素。转化植株在含Km90mg/L生根培养基中生根良好。PCR检测表明,转化植株的条带和质粒中的目的条带一致,而未转化植株没有扩增出任何条带,说明外源基因已经整合到草莓基因组上。 (3)进行试管苗抗冻试验,-5℃时转化植株和未转化植株的生长状况表现出较大差异。转化植株的抗冻能力提高。 (4)对植株的叶片进行电导率测定,在一定低温范围内,转化植株的电导率要明显低于未转化植株。转化植株表现出较强的抗冻能力。 (5)表型分析可见,转化植株在一定低温范围内表现出的抗冻能力要强于未转化植株。 (6)通过提取草莓试管苗的多糖,发现转化植株的多糖含量要高于未转化植株。