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目的初步观察炎症因子(CRP、IL-6)与AMI急诊PCI前后冠脉血流的关系,通过建立CRP浓度刺激的人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)模型,探讨环氧化酶(COX)1、2在炎症因子引起冠状动脉无复流现象中的作用及机制,寻找预测无复流的临床指标,从而为进一步提高PCI术后远期疗效提供可行的治疗方案和指导。方法临床研究:入选2012年1月至2014年1月44例因急性心肌梗死入住本院的患者,其中男性35名,女性9名,年龄31~91岁,平均年龄60.93±14.46岁,梗死时间<12小时。急性心肌梗死的诊断依据美国心脏病学会(ACC)和欧洲心脏病(ESC)学会标准。入选标准:(1)长时间的胸痛(时间>30分钟);(2)标准心电图上在2个或2个以上相邻导联ST段抬高>0.20 mV;(3)胸痛发作6小时内执行直接PCI或补救PCI。为避免其他变量影响C-反应蛋白的水平,术前排除PCI前2个月内有手术或外伤史者、肾功能不全(肌酐>1.50 mg/dl)、恶性肿瘤、发热性疾病,不明原因发热者(体温≥37.5℃),急性或慢性炎性疾病以及近期感染的患者。所有纳入研究的患者均符合完全或部分冠状动脉急性闭塞,参照GIBSON等冠状动脉血流分级方法,相关动脉PCI前TIMI心肌灌注分级(TMPG)为0-1级,术前静脉取血;术后根据患者冠状动脉血流情况分为两组,TMPG 0-1级为无复流组(n=13);TMPG 2-3级为复流组(n=31)。所有患者均自愿参加本研究,签署知情同意书。两组患者一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。采用ELISA试剂盒测定急诊PCI术前血清炎症因子(CRP、IL-6)水平,观察其与术后无复流现象之间的关系。基础实验:构建人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)CRP刺激的模型:(1)CRP刺激试验:对照组、5分钟组、30分钟组和60分钟组,即在饥饿处理后的HCAEC培养皿中加入CRP,于5分钟、30分钟和60分钟分别终止CRP刺激,空白对照组加入等量溶剂;(2)细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)、c-jun氨基末端激酶(c-jun N terminal kinase,JNK1/2)抑制试验:对照组、ERK1/2抑制剂预处理组、JNK1/2抑制剂预处理组和同时加用pd98059和sp600125组(CRP+PD+SP组)。运用Real-Time PCR、Western Blot测定COX1,2基因转录、蛋白表达情况,探讨CRP在无复流发生发展中的作用机制。统计分析:采用应用SPSS 20.0版软件进行数据统计处理,计量资料采用x±s表示,成组设计资料的行t检验;计数资料以百分率表示,多组间的计量资料比较采用方差分析,在方差分析P<0.05条件下,再行组间两两比较。P<0.05为差异有统计学意义。图表资料采用GraphPad Prism 5.0绘制。结果无复流患者CRP、IL-6水平明显高于灌注良好者,差异具有统计学意义(P<0.05);在CRP刺激HCAEC模型中,CRP刺激组COX1,2表达水平高于对照组,应用细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和氨基末端激酶(JNK1/2)抑制剂后COX表达显著降低,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论CRP可通过激活COX炎症通路,诱发AMI急诊PCI术后无复流现象的产生,可能成为急性心肌梗死患者急诊PCI术后发生无复流现象的重要预测因子。