论文部分内容阅读
糖尿病神经病理性疼痛（diabetic neuropathic pain,DNP）是糖尿病常见的并发症之一。糖尿病患者体内持续性的高糖会损伤神经组织,引起神经病变。长期的高血糖还会导致体内一系列的代谢紊乱,机体产生免疫反应,释放某些免疫炎性因子,导致炎症反应。这些高糖和炎症因素共同作用诱发DNP。DNP严重降低了患者的生活质量,其具体发病机制尚不明确,是临床上治疗的一大难题。肾上腺髓质素（Adrenomedullin,AM）属于CGRP超家族成员,是近些年证实的疼痛形成相关肽,在疼痛形成中起重要作用。研究发现,AM在炎性痛、神经损伤病理性痛、骨癌痛及吗啡耐受形成中发挥重要作用。本课题组前期工作证实AM在DNP形成中也发挥作用,但机制尚不明确。胶质细胞在病理性痛的作用受到关注,除了对神经元起支持、营养等作用,在病理性痛外周及中枢敏化进程中起到非常重要的作用。本课题提出AM参与高糖或炎症情况下胶质细胞激活的假设,为研究AM参与DNP机制提供新的内容。研究方法为体外应用高糖或脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）处理大鼠背根神经节（Dorsal root ganglion,DRG）组织或原代星形胶质细胞,检测AM是否发生变化,同时检测AM是否参与高糖或LPS条件下卫星胶质细胞、星形胶质细胞的激活及其相关机制。主要研究结果如下:（1）体外高糖（145 m M）处理DRG 36h,AM表达上调,卫星胶质细胞激活（GFAP、TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA表达上调）;应用AM受体拮抗剂AM22-52能抑制以上现象。具体表现为:应用AM22-52（10μM、20μM及40μM）后,可以抑制高糖诱导DRG中AM（mRNA及蛋白）的升高、卫星胶质细胞激活（GFAP、TNF-α及IL-10 mRNA表达下调,对IL-1β及IL-6 mRNA没有影响）及Na V1.7 mRNA的上调;应用AM22-52（20μM）后,可以下调高糖诱导DRG中GFAP、P2X7及p ERK蛋白的上调。（2）体外LPS（10μg/m L）处理DRG 6 h,AM表达上调,卫星胶质细胞激活（GFAP、TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA表达上调）;应用AM22-52（20μM）后,可以抑制LPS诱导的卫星胶质细胞激活（GFAP、IL-10、TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA表达下调）。应用AM22-52还抑制LPS诱导的Na V1.7及IBa1 mRNA表达上调。（3）体外高糖（30 m M）刺激星形胶质细胞24 h,AM及其受体mRNA表达上调（CLR上调,Ramp2未受影响）,同时引起星形胶质细胞激活（GFAP、TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA表达上调）。应用AM22-52（2μM和20μM）后,可以抑制高糖诱导星形胶质细胞中AM及CLR mRNA表达上调、抑制星形胶质细胞激活（GFAP、TNF-α及IL-1βmRNA表达下调,IL-6 mRNA未受影响）。同时细胞免疫结果显示,AM在星形胶质细胞中有分布。（4）体外LPS（1μg/m L）刺激星形胶质细胞2 h,AM及其受体（CLR和Ramp2）mRNA的表达上调、星形胶质细胞被激活（GFAP、TNF-α、IL-1β、IL-6及CCL2 mRNA表达上调）。应用AM22-52（2μM和20μM）后,均可以抑制上述现象。研究结论:AM可以调控由高糖或LPS诱导DRG卫星胶质细胞和中枢星形胶质细胞的激活,引起卫星胶质细胞和星形胶质细胞释放炎性因子。卫星胶质细胞通过嘌呤受体与神经元相互作用,并引起神经元兴奋。