结核病(Tuberculosis,TB)是感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)所引起的全球感染率和死亡率最高的传染病。据估计,世界三分之一的人口处于结核分枝杆菌感染的潜伏期,而且这一潜伏期随时可能转变为活动性结核。接种结核疫苗仍然是工业化国家和发展中国家改善公共卫生最节省成本、有效益的方法。迄今为止,卡介苗仍是唯一获得批准的结核病疫苗,然而它在预防成人肺结核方面基本无效,而且不能预防潜伏的结核感染(Latent Tuberculosis Infection,LTBI)。因而,我们迫切需求一种安全有效的疫苗来预防结核病。本文的主要目的是利用诺如病毒P颗粒作为抗原呈递载体增强结核分枝杆菌主要抗原CFP10的免疫原性,构建表达含CFP10抗原的亚单位疫苗,并对其进行初步的免疫学评价,为结核新型疫苗的研发奠定基础。本研究主要包括以下三个部分:第一部分,运用基因重组技术构建含CFP10的纳米颗粒的原核表达质粒,并进行蛋白空间结构的预测;第二部分,通过诱导剂IPTG诱导重组蛋白的表达,再使用亲和纯化的方式对融合蛋白进行纯化后,去除GST标签获得嵌合蛋白;第三部分,用去除标签的嵌合蛋白免疫小鼠,通过ELISA和流式技术对嵌合蛋白的免疫原性进行初步评价。经过以上研究,我们得到如下结果:1)成功构建了含结核分枝杆菌主要抗原CFP10的重组质粒,并对该融合蛋白进行了蛋白空间结构的预测;2)表达纯化的融合蛋白能够自发的形成直径约为20nm的纳米颗粒;3)小鼠免疫八周后获得的抗体经ELISA检测发现,PBS和P颗粒蛋白免疫组的抗体效价较低,可视为阴性。P颗粒-CFP10蛋白免疫小鼠对三种抗原肽CFP1011-25,CFP1027-39,CFP1071-85的抗体效价分别1:13440、1:7680和1:163200。CFP10蛋白免疫小鼠的血清对于三种抗原肽 CFP1011-25,CFP1027-39,CFP1071-85 的抗体效价约为 1:1600、1:1600 和1:1280;4)PBS、P颗粒、P颗粒-CFP10以及CFP10免疫小鼠后,取脾脏细胞及培养的骨髓细胞进行流式分析发现:i四个免疫组小鼠脾脏细胞的中心记忆性T细胞占淋巴细胞的比例分别为1.39%、2.21%、2.12%、2.84%,效应性记忆T细胞的占比分别为6.89%、6.93%、6.77%、5.81%;ii脾脏细胞的特异性T细胞占淋巴细胞的比例分别为0.1 5%、0.09%、0.11%、0.10%;ⅲ四组免疫小鼠诱导产生的巨噬细胞占骨髓细胞的比例分别为1.82%、4.11%、0.38%、3.17%。综上所述,本研究构建纯化了含CFP10嵌合蛋白的纳米颗粒,并且证明了 P颗粒作为载体可以增强所呈递抗原CFP10的免疫原性。并使用该纳米颗粒对小鼠进行了免疫,免疫后的小鼠产生了针对结核抗原肽的高效价抗体,并且产生了针对该抗原的记忆细胞。总之,本研究为结核新型亚单位疫苗的研发奠定了基础,也为其他嵌合疫苗的研发提供了新思路。